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安普霉素对不同土壤中微生物活动的影响 刁晓平1, 3，孙英健2，孙振钧1*，沈建忠2 1. 中国农业大学资源与环境学院，北京 100094；2. 中国农业大学动物医学院，北京 100094；3. 海南大学生命科学与农学院，海南 海口 570228 摘要：研究了兽药抗生素安普霉素对不同土壤中微生物呼吸活动和对土壤中微生物种群生长的影响，了解该药物对土壤生态系统生态毒理学效应，以便为药物的环境安全性评价提供依据。利用直接吸收法（密闭法）测定安普霉素对土壤微生物呼吸活动的影响，结果表明：安普霉素对不同土壤中微生物呼吸活动的影响有所差异。在污染的中后期，长春土中加入一定量的安普霉素能刺激土壤的呼吸作用。在染毒的前期，安普霉素对成都土中CO2的释放量均有抑制作用。采用稀释平板法测定了药物对不同土壤中细菌、真菌生长的影响。实验结果显示：安普霉素对土壤中的细菌的生长具有明显的抑制作用，成都土和长春土的抑菌作用最为明显；同时安普霉素的这种抑制作用还表现出时间差异，24 h的抑制率高于48 h。安普霉素对土壤中真菌生长的影响表现出地域差异，低质量分数的安普霉素对成都土和武汉土中的真菌没有抑制作用。在所测的四种土壤中，南京土中药物对真菌的平均抑制率最高。这可能与土壤中微生物的种类和种群结构有关。安普霉素对不同土壤中对真菌的抑制作用，随药物质量分数的降低和作用时间的延长而降低。 关键词：安普霉素；土壤微生物；呼吸活动；微生物种群 中图分类号：X171.5 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2004）04-0565-04 随着集约化畜牧业的发展，兽药和饲料添加剂的负面影响日渐凸现。动物性食品中的药物残留、动物对病原微生物易感性的增加已引起人们的高度关注。使用后的兽药或饲料添加剂经过一定的转归进入土壤生态系统，并随食物链影响其中动物、植物和微生物，对生态系统造成不良的影响。因此排放到环境中的药物对环境生物的潜在毒性也成为近年来国际上研究的热点?1, 2?。 微生物在土壤生态系统中起着重要的作用，它们对氮和碳等物质的循环起着主导作用。例如，对于生物遗体的分解异化，在氮的循环中微生物亦进行固氮、脱氮作用，同时进行硝化、反硝化。土壤微生物是耕作土壤重要组成部分，其组成种类及数量即为土壤肥力的重要指标。在土壤的生态系统中起着重要的作用，它们不仅参与土壤中碳和氮的循环，而且其种类和数量是土壤肥力的重要指标，同时土壤中的微生物还是土壤中的蚯蚓等无脊椎动物的营养来源?3?。近年来，化学物质与土壤微生物的关系已成为环境科学的重要研究领域。 安普霉素是由Steptomyoes tenebrarius菌株发酵而产生的，属于氨基环醇类抗生素，多用作饲料添加剂来防治动物的疾病和促进动物的生长，使用量大。国外学者研究发现，日粮中连续3周添加75100 mg/kg的安普霉素，可分别提高断奶仔猪体增质量11%和24%[4]。安普霉素多以原药的形式随动物的粪便排出体外，它们在环境中的代谢和对环境生物的影响尚未见文献报道。本实验旨在通过研究安普霉素对土壤微生物活动的影响，了解该药物对土壤生态系统生态毒理学效应，以便为药物的环境安全性评价提供依据。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 供试土壤 采自南京、成都、武汉、长春，取自表层10 cm下的土壤晾干，过1 mm筛，经常规测试后备用。 1.1.2 供试样品及试剂 安普霉素：纯度62.5%，由河南濮阳泓天威药业公司生产。NaOH(分析纯)；HCl(分析纯)；氯化钡(BaCl·H2O，分析纯)；丙酮(分析纯)，均为北京试剂厂提供。 细菌培养基：普通营养琼脂培养基。 真菌培养基：孟加拉红-链霉素培养基，成分为：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1.0 g，硫酸镁0.5 g，孟加拉红水溶液100 mL，加蒸馏水800 mL，121 ℃灭菌15 min，冷却至55~60 ℃，每100 mL培养基加入0.03%硫酸链霉素溶液（含链霉素30 ?g/mL）10 mL。 1.2 试验方法 1.2.1 土壤分析方法?5? a）pH值：电位法。 b）有机质的测定：铬酸氧化还原滴定外热源法。 c）全氮：半微量凯氏定氮法。 d）速效磷：NaHCO3浸提____钼锑抗吸光光度法。 e）速效钾：NH4AC浸提____火焰光度法。 f）质地：体积质量计法。 1.2.2 安普霉素对土壤中微生物呼吸活动的影响 采用直接吸收法（密闭法）滴定测定[6]。测定原理为：在一个密闭系统内放置土壤及过量的NaOH标准溶液，土壤微生物在呼吸过程中释放出来的CO2由NaOH吸收。在BaCl２存在条件下，用HCl滴定剩余的NaOH，根据消耗的盐酸量求得释放出的CO2量。 取50 g供试土壤，加入1 g葡萄糖，混