青蛙腓肠肌试验.docVIP

实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备 目的 学习坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 原理 两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。 实验对象 蟾蜍 实验用品 蛙类手术器械、烧杯、培养皿、棉球、纱布、细丝线、任氏液、粗剪刀、蛙板等。 实验步骤 1.破坏脑和脊髓 左手持蛙，用食指压其头部前端，使头前俯。右手持探针由头端沿正中线向后划，触到凹陷即为枕骨大孔，将探针由此垂直刺入。再将探针折向前方，插入颅腔内并左右搅动捣毁脑组织。再将探针退回至进针处，针尖转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。此时蟾蜍四肢瘫软，表明脑脊髓已完全破坏。 2.剪除躯干上部及内脏 用粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱。左手握住后肢，右手持剪刀沿脊柱的断口向下剪开两侧的皮肤及肌肉，再剪除已下垂的躯干上部及内脏。 3.剥皮 剪掉肛门周围的皮肤，左手捏脊柱断端（勿触碰神经），右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉两后肢皮肤。将标本背位放于表面有少许任氏液的蛙板上，洗净双手及用过的器械。 4.游离坐骨神经 沿脊柱两侧用玻璃分针分离坐骨神经，用线在坐骨神经靠近脊柱处结扎并剪断。左手捏住脊柱，右手持剪刀从背面剪去向上突出的尾骨。然后从腹面沿中线将脊柱剪成两半。捏住两侧下肢带骨用力向两侧掰，使耻骨联合处脱臼，再从耻骨联合中央剪开两后肢，一后肢放入盛有任氏液的平皿中备用，一后肢用玻璃分针划开梨状肌及其附近的结缔组织，循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂隙处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针将腹部的坐骨神经小心勾出来，手执结扎神经的线，剪断坐骨神经的所有分支，一直游离至膝关节。 5.完成坐骨神经腓肠肌标本的制备 将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，在股骨中部剪去`上段股骨。再在跟腱处以线结扎，剪断并游离腓肠肌至膝关节处，在膝关节以下将小腿其余部分剪掉。这样即制得附着于股骨上、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本（见图11）。 6.检查标本兴奋性 用浸有任氏液的锌铜弓轻触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，表明标本兴奋性良好。如无锌铜弓，也可用中等强度单个电刺激作上述测试。 将标本放在盛有任氏液的培养皿中待用。 注意事项 1.避免用力牵拉神经或用手、金属器械直接接触神经。 2.游离腓肠肌时，必须保全其上的腓肠肌。 3.实验过程中要随时检查标本兴奋性，以便及时发现失误。 4.制备坐骨神经时，一定要把神经表面的结缔组织膜、血管、凝血块等清除干净。 思考题 1.为什么在制备坐骨神经腓肠肌标本过程中要不断滴加任氏液？ 2.试述刺激坐骨神经引起腓肠肌收缩的过程中包含哪些机制。 3.如何判断制备的神经肌肉标本的兴奋性？ 实验二 反射弧分析 目的 本实验利用脊蛙分析反射弧的组成和验证反射弧结构的完整性与反射活动的关系。 原理 在中枢神经系统参与下，机体对刺激所作的适应性反映称为反射。反射活动的结构基础是反射弧，它一般包括感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分。反射弧的任一环节发生障碍或受到破坏时，该反射都将减弱或消失。 实验对象 蟾蜍 实验用品 蛙手术器械一套、支台、蛙板、培养皿、线、棉球、1%盐酸等。 实验步骤及观察项目 1.制备脊蛙并悬吊于支台上。 2.用培养皿盛1%盐酸溶液，将蟾蜍左后肢的中趾趾端浸入盐酸溶液，观察其反应。再将右后肢的中趾趾端浸入盐酸溶液中，观察其反应。 3.用浸透1%盐酸的滤纸片粘贴在蟾蜍下腹部，观察是否右搔扒反射。 4.在左后肢踝关节上方，将皮肤作一环行切口，剥去切口以下皮肤，重复2观察结果。 5.在右后肢大腿部分离出坐骨神经并剪断，重复2观察结果。 6.破坏脊髓后，重复2观察结果。 实验结果 实验讨论 实验结论 思考题 1.在反射弧分析各项实验中，会出现什么结果，其机制是什么？ 2.用盐酸溶液浸趾尖引起的屈腿反射的反射弧包括哪些具体组成部分？ 实验三 离体蛙心灌流 目的 学习离体蛙心灌流方法，观察内环境理化的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用。 原理 心脏的正常活动，需要有一个合适的理化环境，离体蛙心在模拟其内环境条件下，如氧和营养物质的供应，适宜的无机盐离子浓度、酸碱度、渗透压、温度等。可以较持久的维持其生理特性。蛙的心脏无冠状循环，其心脏的血液供应直接来自心室腔，将插管直接插入心室腔，管内充以任氏液，在一定时间内，心脏仍然能维持其正常的跳动，改变灌注液的成分，则可引起心脏活动的改变。 实验对象 蟾蜍 实验用品 蛙类手术器械、蛙心灌流插管