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生物膜异养菌衰减系数的原位测定1 邱玉琴，周小红，施汉昌 清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室，北京 (100084) E-mail：hanchang@ 摘 要：以分离式氧微电极为测试工具，在优化了电极结构的基础上，对内源呼吸状态的生 物膜内部的溶解氧分布进行了准确测定，通过生物膜内扩散-反应过程的分析，拟合获得了 生物膜内异养菌的衰减系数。结果表明，经过结构优化后，氧微电极的信号波动范围由优化 前的（1.64 ±0.25 ）nA 降低到优化后的（1.53 ±0.06 ）nA ，波动抑制比为19.41 dB，输出信 号的稳定性增强。用原位测定方法获得的生物膜内异养菌在处于内源呼吸状态时的呼吸速率 为2.979 mg/h ，衰减系数为0.0059 h-1 。 关键词：生物膜 衰减系数 氧微电极 内源呼吸 中图分类号： 1．引言 在微生物生长过程中，当外界的基质浓度不足以提供其生长所需时，微生物处于内源呼 吸阶段。在该阶段，微生物的自身氧化速率常数称为衰减系数[1] 。微生物的衰减系数对于污 泥产率和需氧量预测起着重要作用。研究者多采用呼吸速率法来获得悬浮生长的活性污泥系 统的衰减系数[2] 。但是，由于生物膜复杂，各相异性的内部结构及传质限制，所报道的计算 生物膜衰减系数的方法较少。许多研究人员采用活性污泥的衰减系数直接替代生物膜衰减系 数[3,4]，或者将生物膜破碎，等同于悬浮生长体系后，用呼吸速率法获取微生物的衰减系数 [5,6] 。但这 2 种方法都不能体现出附着生长的微生物体系与悬浮生长体系的差异，从而不能 真实地反映出生物膜的衰减系数。 近年来微电极技术发展迅速，已经成为环境领域重要的研究工具，其中，氧微电极的应 用最为成熟。20 世纪 60 年代末，Bungay 等[7] 已经将氧微电极应用于滴滤池中生物膜的传质 和反应的研究。近年来，Bishop 等[8]进一步将氧微电极应用到生物膜内分层结构和反应机理 的研究中来，使氧微电极在生物膜内的应用更加成熟。 本研究的主要目的是建立一种新的获得生物膜衰减系数的方法。实验采用氧微电极原位 测定处于内源呼吸状态的生物膜内的氧分布情况，结合扩散-反应方程拟合获得微生物的衰 减系数。原位测定结果能够更真实地描述附着生长型微生物的衰减过程，对优化生物膜模型 具有十分重要的意义。 2 ．材料与方法 2.1 生物膜的培养条件 研究中采用间歇式反应器培养生物膜。反应器为 500mL 的玻璃烧杯，采用磨砂曝气头 连接小型曝气机曝气。接种污泥来自小试规模的氧化沟反应器。生长生物膜的载体采用表面 打磨的有机玻璃平板（3 cm×3 cm ）。进水为清华大学校内生活污水，每半天换水。 2.2 生物膜原位测试系统的搭建 对生物膜衰减系数进行原位测定需要搭建原位测试系统。测试系统的详细介绍见文献 [9] 。系统主要由三维电动微动平台（WN103TA100M ，北京微纳光科仪器有限公司），氧微 电极，双通道皮安计（PA2000 ，Unisense ，丹麦），微型测量槽（60 mm×60 mm×10 mm ）， 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20020004020 ）的资助。 -1- 数据采集卡（UA303 ，北京优采）和PC 机组成。当接种平板上的生物膜生长到一定厚度后， 将其取出固定在微型测量槽中待测。氧微电极固定在三维电动平台的夹具上，在电动平台的 精确控制下以 50 μm 步长沿着垂直生物膜方向深入到膜内部进行检测，检测得到的电流信 号通过皮安计显示出读数，并同时通过数据采集卡传输到计算机上进行实时显示。 2.3 氧微电极的结构优化 在原位测试系统中，氧微电极是最重要的检测工具，其信号稳定性直接决定了研究结果 的可靠程度。现在使用比较多的是带有保护阴极的Clark 微电极，但是它制作复杂，所以本 研究选用制作过程简单的分离式氧微电极。分离式微电极的制作方法见文献[10] 。与Clark 微 电极相比较，分离式微电极的信号稳定性比较差，因此，本研究对