植物脱毒.ppt

* 热处理或温热疗法。其基本原理是一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35℃～40℃）即钝化失活。因而将植物置于一定高温下处理一段时间后，病毒失活而植物基本不受伤害。 植物脱毒技术 二、热处理脱毒 （1）温汤处理 将材料放置50℃左右热水中浸数分钟至几小时，可使病毒失活。 优点：简便易行，适于离体材料和休眠器官的处理， 缺点：是易伤害材料。 植物脱毒技术 热处理方法 将盆栽植物移入室内或生长箱中，以35℃～40℃温度处理几十分钟至数月。 按植物种类、器官类别和生理状况及待脱除病毒的种类等，确定处理温度与处理时间。 如草莓以36℃处理6周可脱除轻型黄边病毒（SMYES） 马铃薯以37℃处理20d就可脱除卷叶病毒（PLR）。 植物脱毒技术 （2）热风处理 每种植物都有热处理临界温度，过高温处理会造成对植物的伤害 。采用变温处理则可消除病毒不伤及植物。 如以每天40℃4h与 16℃～20℃20h交替变温处理马铃薯块茎，既清除了芽眼中的病毒，又保持了芽的活力。 植物脱毒技术 （2）热风处理 尽管分生组织常常不带病毒，但也有一些植物茎尖带有病毒。 在麝香石竹0.1mm的茎尖培养中，33%的材料带有麝香石竹斑驳病毒。 在菊花茎尖培养中，由0.3～0.6mm长的茎尖愈伤组织形成的植株全部带有病毒。 已知能侵染茎尖分生组织区域的其他病毒还有马铃薯花叶病毒（TMV）、马铃薯X病毒（PVX）以及黄瓜花叶病毒（CMV）。 在这种情况下，把茎尖培养和热处理结合起来，能明显提高脱毒率。 植物脱毒技术 三、热处理结合茎尖培养脱毒 热处理结合茎尖培养法是在单独使用热处理或单独使用茎尖培养都不奏效时使用。 如侵染菊花的病毒有10余种，象菊花矮缩病毒（CSV）和菊花番茄不孕病毒（TAV），就可以通过使植物在35℃～38℃条件下，处理2个月，来达到经热处理使病毒失活的去病毒效果（不经组织培养）。 如果要去除或尽量削弱退绿斑驳病毒、轻斑驳病毒、B病毒等，则单用热处理难以奏效，必需通过茎尖培养结合热处理来实验脱毒效果。 如在38℃下处理140d，未能去除康乃馨蚀环病毒，结合茎尖培养则可以除去。 植物脱毒技术 三、热处理结合茎尖培养脱毒 热处理可以在茎尖离体之前的母株上进行，也可以在茎尖培养期间进行。 前一种方法可以使母枝快速生长，茎尖生长速度远远高于病毒复制和传播的速度，离体茎尖外植体可以比不经热处理的大一点，这样既可以保证高的脱毒率，又可以提高离体茎尖的存活率和再生植株百分数。 热处理结合茎尖培养的脱毒方法已成功地用来对马铃薯、菊花、石竹、草莓进行脱毒。 植物脱毒技术 三、热处理结合茎尖培养脱毒 （一）愈伤组织培养脱毒 （二）珠心胚培养脱毒 （三）微尖嫁接脱毒 （四）花药培养脱毒 （五）蒜薹圆盘培养脱毒 （六）化学处理 植物脱毒技术 四、其它脱毒方法 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 依据是愈伤组织细胞带病毒不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生出的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒浓度下降。甚至检测不出病毒。 植物脱毒技术 （一）愈伤组织培养脱毒 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织细胞发生了抗病毒突变。此外，在母株上也存在抗病毒的细胞，它们与感病毒的细胞并存，采用它们存在部位的组织离体培养，所获再生植株中有较高比例的无毒株。 马铃薯茎尖愈伤组织再生植株中，不含马铃薯X病毒（PVX）植株的频率高达46％，远高于茎尖直接成苗植株的频率。 植物脱毒技术 愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外，还有多个珠心胚。珠心胚由珠心组织细胞即体细胞分化形成，具有和母体相同的遗传特性。病毒一般不通过种子传播，因而通过珠心胚培养获得的再生植株是无毒的，同时又保存了母株的遗传特性。 植物脱毒技术 （二）珠心胚培养脱毒 柑橘珠心胚培养直接取花后约 7周的幼果胚囊，接种后，先在 25±2℃黑暗条件下培养一个月，再转光照培养（1000lx，12h）。 3～4周即发生球形胚和愈伤组织，9～10周分化子叶，苗高3cm左右移植到营养钵蛭石基质中继续培养，7周左右可移栽到土中。 植物脱毒技术 （二）珠心胚培养脱毒 珠心胚大多不育，必须经分离培养才能长成正常植株。此外，珠心胚苗处于童期，长势强旺，还带有部分