二 细菌的简单染色及革兰氏染色.pptVIP

实验二 细菌的简单染色及革兰氏染色 * 实验目的 1、掌握细菌染色的原理 2、掌握细菌简单染色和革兰氏方法 * 实验原理---单染色 1、染色效果与染料及菌体电荷的关系： 碱性染料离子（+） 菌体—（-） 酸性染料离子（-） 菌体—（+） 碱性染料：如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等 酸性染料：伊红、酸性复红或刚果红等 中性染料：前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等 2、细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料使其着色。 细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被酸性着色。 * 实验原理---革兰氏染色主要由于两类细菌的细胞壁成分和结构不同。 * 大肠杆菌革兰氏染色 * 炭疽芽胞杆菌 * 实验器材 1、材料 大肠杆菌；枯草芽孢杆菌 2、试剂或染液 草酸铵结晶紫；碘液；95%乙醇；复红溶液； 蒸馏水 3、其他 载玻片；接种环；酒精灯；打火机；卫生纸；酒精棉球 * 实验步骤----简单染色： （1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌液。再取干净载玻片一块将刚制成的苏云金杆菌浓菌液挑2-3环涂在左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取2-3环涂在右边制成薄涂面。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。 （2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜） * （4）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 （5）水洗：用水洗去涂片上的染色液 （6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 * 实验步骤—革兰氏染色 制片→初染（结晶紫1min）→水洗→媒染（碘液1min）→水洗→脱色（乙醇20-30s）→水洗→复染（番红2min）→水洗→干燥→观察 * 大肠杆菌杆菌 枯草芽孢杆菌 * 实验作业 绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的结果，判断期阴阳性。 *