SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法快速鉴定新城疫病毒毒力.pdfVIP

· 80 · AnimalHusbandry＆Veterinary Medicine 2008 Vo1．40 No．11 SYBRGreenI荧光RT．PCR方法快速鉴定 新城疫病毒毒力 伍祥龙 ，殷俊磊 ，伍 明山 ，文 明 ，周碧君 ，李永明 (1．贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025； 2．贵州省草种场，贵州 独山 558203；3．贵州省安顺市畜牧局，贵州 安顺 561000) 摘要：为快速鉴定不同新城疫病毒株 (NDV)毒力，我们以NDVF蛋白裂解位点附近的基因序列自行设计 1对引物，对不同毒力NDV毒株进行 荧光RT—PCR扩增，根据其扩增效率及扩增产物熔解温度 (Tm)值大小进行NDV毒株毒力的鉴定，建立了能区分NDV强弱毒株的SYBRGreen I荧光RT—PCR方法；同时将其与鸡胚平均致死时间 (MDT)测定和F蛋白裂解位点序列分析结果进行比较。结果发现：建立的SYBRGreenI 荧光RT—PCR方法只需4h即呵判定结果，NDV强弱毒株扩增产物Tm值为 (83±0．5)℃且有2个峰值，阴性对照Tm值为 (81±0．5)℃且只有 1个峰值；对NDV强毒株的扩增效率即ct值在ll一2O之间，NDV弱毒株ct值在25～30之间，阴性对照Ct值在30以上，Ct值在2O～25之问为 强弱毒株}昆合物。该方法检测结果与MDT测定和F蛋白裂解位点分析结果一致。应用 SYBRGreenI模式荧光RT—PCR方法与普通 RT—PCR方 法和鸡胚接种鉴定方法分别对 8O份l临床组织样品进行检测，强毒株的检出率均为53．75％ (43／80)，而弱毒株的检出率相应为31．25％ (25／ 80)、27．50％ (22／80)和35．(x】％ (28／80)，检出符合率达 89．3％以上。这些结果表明建立的SYBRGreenI荧光RT—PCR方法具有特异、准 1J 确、快速等特点，可用于l临床病料样本NDV毒株的毒力鉴定。 关键词 ：新城疫病毒；SYBRGreen1模式荧光RT—PCR；毒力；鉴定 中图分类号：$852．65 文献标识码：B 文章编号：0529—5130(2008)l1．0o80．04 新城疫 (Newcastledisease，ND)是由新城疫病 床上常用弱毒或中等毒力毒株疫苗进行免疫注射来进 毒 (Newcastlediseasevirus，NDV)引起禽类的一种 行ND疫情的控制，导致兽医工作者在进行临床病例 急性、高度接触性传染病，常给世界养禽业造成巨大 新城疫诊断时，常需要对新城疫现场分离株的毒力强 的经济损失，被世界动物卫生组织列为通报疫病。临 弱进行鉴定后才能确诊。确定 NDV现场分离株的毒 力，常用的方法有鸡胚平均致死时间 (MDT)、脑 内 收稿 日期：2008．02—28 致病指数 (ICPI)测定、静脉致病指数 (IVPI)测 基金项 目：贵州大学博士基金项 目 [贵大人科合字 (2006)]； 定等方法，但这些方法在实际操作过程中存在费时、 贵州省自然科学基金项 目 [黔科合字 (2005)2030]。 费力和重复性差等缺点 ¨。因此需要寻求一种简单 作者简介：伍祥龙 (1979．)，男，硕士研究生。 通讯作者。 快速的NDV毒力鉴定方法。 应引起重视。应该尽快建立起 KHV的PCR检测和单 2002：25(3)：l71．178． 克隆抗体等诊断方法和手段，以消除进出口贸易中的 GiladO，YunS，AndreeK B，eta1．Initialcharacteristicsofkio