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DNA提取和含量测定
DNA的提取及含量测定;[实验目的及要求] ;[实验原理];[实验仪器及用品];[实验内容及步骤];二、DNA的定量测定(二苯胺法)
1.标准曲线的绘制
按下表加入各种试剂,混匀,于60℃恒温水浴中保温45min,冷却后,在595nm波长下,于722型分光光度计上比色测定,以吸光度对DNA浓度作图,绘制标准曲线。;样品的测定
吸取样品1.0mL,加入蒸馏水1.0ml,混匀。然后准确加入二苯胺试剂4.0ml,混匀,于60℃恒温水浴保温45min,冷却后,选595nm波长,于722型分光光度计上比色测定,根据测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。;3.计算100g猪肝中DNA含量
ω= m1/m2
式中 ω:DNA的质量分数;
m1:样液中测得的DNA的质量;
m2:样液中所含样品质量。;三、实验现象及数据处理
仔细观察所得到的DNA,记录其形状、颜色。在含量的测定时,绘制出标准曲线,查出其浓度,并换算成质量,然后代入公式中计算出DNA的含量。
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