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DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析
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薄层层析(Thin-layer chromatography,TLC)
薄层层析
---是吸附剂在平滑的玻璃板或聚脂薄膜上铺成薄层作为固定相,以溶剂作为流动相,将样品中各组分分离的方法。
分离原理:
——吸附层析
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吸附层析的概念及原理
吸附
---一种物质被聚集在另一种物质表面的现象。
吸附剂:
---凡是能够将其他物质聚集到本身分子表面的物质称为吸附剂,如氧化铝、硅胶等。
被吸附物
---聚集在吸附剂表面的分子就称为被吸附物。
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吸附层析(Absorption Chromatography)
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心,利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.
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主要是利用吸附剂对不同物质吸附力的不同而达到分离的目的。
薄层层析中吸附剂选择是关键。
吸附剂
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吸附剂的选择
(1)应不溶于所使用的溶剂;与所使用的溶剂和样品中各组分不起化学反应;
(2)应具有较大的吸附表面(吸附容量)和一定的吸附力;对被分离个组分有不同的吸附力,有足够的分辨力;
(3)吸附剂颗粒大小要均匀,保持良好的重复性。
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吸附剂的吸附能力
常称为活度,用罗马字母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ表示。
活度 强 弱
含水量 多 少
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常用吸附剂
极性:
硅胶:
为首选吸附剂。本身具微酸性,适用于分离酸性及中性物质。
氧化铝:
氧化铝具有分离能力强、活性可以控制等优点
碱性/中性/酸性氧化铝
……
非极性:
纤维素
聚酰胺:
→合成:己二酸、己二胺
→特点:氢键吸附剂
……
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是—类化学纤维原料,即锦纶(又称尼龙)。由己二酸与己二胺聚合而成。
因为在这类物质分子中都含有大量酰胺基团,故统称聚酰胺。
聚酰胺
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——是由于聚酰胺的-C=O(羰基)及NH(氨基)能与被分离物质之间形成氢键。
如酚类(包括黄酮类、鞣质等)和酸类(如核苷酸、氨基酸等)是以其羟基与酰胺键的羰基形成氢键
如硝基化合物和醌类等物质与酰胺键的氨基形成氢键
被分离物质形成氢键能力的强弱,确定吸附能力的差异。
在层析过程中,展层溶剂与被分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。因此选择适当的展层溶剂,使被分离物质在溶剂与聚酰胺表面之间的分配系数能有较大差异,经过吸附与解吸的展层过程,可以一一分离.
聚酰胺对极性物质的吸附作用
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溶剂
不同溶剂具有不同的结构性质,依极性大小各种溶剂的洗脱能力各不相同。
一般所选溶剂要求:
a.纯度合格
b.黏度要小→易与样品中各组分相分离
c.与所欲分离样品和吸附剂不起化学反应
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溶剂选择考虑因素
1、溶剂与吸附剂之间的相互作用力
2、溶剂与样品之间的作用因素
溶剂的选择可通过实验来确定。
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薄层层析的操作
1、点样
样品最好溶解在挥发性的溶剂中,如氯仿、丙酮等,
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