位点专一性重组.PPT

第一节 同源重组 第二节 位点专一性重组 第三节 转座重组 第四节 异常重组 染色体的遗传差异主要由两种 机制产生，一种是突变，一种是遗传重组。 损伤修复、适应环境、加速进化 遗传重组：指遗传物质的重新组合，其共有的特征是DNA双螺旋之间的遗传物质发生交换。遗传重组的存在确保了遗传物质代与代之间基因组的重排，从而形成一个物种内部个体之间的遗传差异。 只要有DNA，就会发生重组。 重组不只是在减数分裂和体细胞核基因中发生，也在线粒体基因间和叶绿体基因间发生。 二、进行同源重组的基本条件 （1）发生同源性重组的两个区域的核苷酸序列必须是相同或非常相似的。 同源性重组常常只发生在两个DNA分子中的相同部位。 （2）双链DNA分子之间互补碱基进行配对 两个DNA分子的链之间互补的碱基配对确保重组只发生在同样的基因座之间。 在该部位两个双链DNA分子通过链之间互补的碱基配对被维系在一起称为联会。 （3）重组酶 参与重组反应的酶保证重组的顺利进行。 重组过程中，每个分子的链首先断裂，然后进行修复和连接，两个DNA分子之间发生交换;重组完成后，重组分子的解离和释放等过程均是在酶催化下进行的。 （4）异源双链区的形成 同源性重组时，在两个DNA分子之间互补碱基配对的区域称为异源双链区（heteroduplex region）。 三、同源性重组的分子模型 第一个被广泛接受的重组模型是1964年由Robin Holliday提出的Holliday模型。 即将发生重组的两个DNA分子同一个部位的两个单链的断裂，从而引发重组。 两个断裂单链的游离端彼此交换，形成两个异源双链，然后末端连接形成Holliday连接体（Holliday Junction）。 一旦Holliday连接体形成后，它能进行重排从而改变链的彼此关系。这种重排称为异构化，因为在此过程中没有键的割裂。 一旦形成Holliday连接体后，就能被拆分。 Holliday结构形成的分子机制 双链侵入模型(前面已介绍） 单链侵入模型 双链断裂修复模型等 粪生粪壳菌的基因转变现象 第二节 位点专一性重组 二、λ噬菌体DNA的整合与切除 为了进入溶源状态，游离的 DNA必须整合（intergrate）到细菌DNA中去；而为了从溶源状态向裂解状态转化，原噬菌体DNA则必须从细菌染色体DNA上切除（excise）。 整合和切除均通过细菌DNA 和λDNA上特定位点—附着点（attachment site，att）之间的重组而实现。 细菌染色体上的附着点（attλ）称为attB ，含有B、O、和B’三个序列（BOB’），长度约25bp。 突变后可以阻止λDNA的整合。 2. λ-DNA从E.coli的切离： 4、λ噬菌体DNA的整合机制 λDNA的整合涉及到attB 和attP的核心序列DNA链的割裂和重接，重组交换位点相距7bp。 首先在attB 和attP位点上产生同样的交错切口，形成了5’-OH和3’-P的末端。两个核心区的断裂完全相同，连接过程不需要任何新DNA的合成。 在整合反应中，互补的单链末端交互杂和、连接并完成整合过程。 转座重组的遗传学效应 引起插入突变 插入位置出现新基因 原来位置上保留原有的转座子 造成插入位置上受体DNA形成正向重复序列 改变染色体结构 第四节 异常重组 异常重组（illegitimate recombination）是指发生在彼此同源性很小或没有同源性的DNA序列之间的重组。异常重组可发生在DNA很多不同的位点之上。 异常重组可能是最原始的重组类型，不需要对特异性序列进行识别的复杂系统或对DNA同源序列进行识别的机制。 异常重组按其机制主要分为两类：末端连接（end-joining）和链滑动（strand-slippage）。 末端连接是指断裂的DNA末端彼此相连。 链滑动是指DNA复制时，由一个模板跳跃到另一个模板所引起的重组。 许多DNA序列都可发生上述两类的异常重组，这直接威胁着基因组的完整性，但同时也是进化的重要途径。 异常重组能够产生许多不同的结果，例如移码、缺失、倒位、融合和DNA扩增。 一、末端连接 在40年代首次被Barbara McClintock发现。 断裂末端可以通过断端直接对接相连。然而，如果断端不能直接相连（如两末端的极性相同时），它们可以通过碱基配对，然后末端合成修复。 断裂连接后产生新的连接体。该过程和末端DNA的序列无关，也不要求两端之间有任何同源性。 二、链滑动 1966年，George Streisinger提出 通过新合成的DNA链与其模板的错配可导致移码突变。同样机制在较大的范围内发生时，可以产生DNA的缺失和扩增。 某些正向重复序列似乎是链滑动发生的热点。 O 序列 λ噬菌体的附着位点称