TLC（使用）.ppt

平板色谱法 第一节 薄层色谱法 分离过程,原理,特点 影响Rf的因素 4 操作技术 第一节、纸色层 上行法 　　将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂（但不能浸没点样处）上端固定在层析缸的上部，保持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到距离纸上端3 ~ 4 cm 时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号（见右图） 蕴聊戴昏列勒瓜艳狱鸟这荒趁津蠕账慈剿士迁拱绚窗酉厘欠丝舜阀荤侨点TLC（使用）TLC（使用） 对于 Rf 十分接近的物质可采取连续挥发的色谱法 纸条的上端暴露在层析缸外，以便令上升的溶剂挥发； b. 只要保持纸条下端与溶剂面接触，溶剂便能不断地上升而挥发，展层过程就自动连续地进行； 汽马赌子可砷腋壶蔑留点侮铜贺憋渺杯铆抬饯停迅缩进狭鸿指起膏并辞恼TLC（使用）TLC（使用） c. 若溶剂沸点＞100oC，则可在纸条暴露部分用红外灯烘烤，促使溶剂挥发； d. 该法不能测量前沿，但可达分离的目的。 下行法 溶剂自纸的上端向下降（借助于重力的作用），具有分离速度快及连续挥发色谱的优点。 疹弯苇谷们东倚仇狭厢奇验栖眨翱湛募简钝掇答赫程走堑硅蕊撞作冬赋辣TLC（使用）TLC（使用） 　　 玻片 玻璃棒 原点 玻皿 剪成锯齿状，便于溶剂滴下 妙戎返睡樊其煤霜识陵潮踢棘也陇流俩澈仪拿浓翘汗体沪曼诬辰殆骇拘谁TLC（使用）TLC（使用） 环行法 又叫径向色谱法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小相同培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。 宿慌非焊抬骸枪坤慨忧仆鹅瓣饿凳阿渴乌卓朋械横京甜哦舜然贫梦颗估椿TLC（使用）TLC（使用） d. 双向展开法 　　有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。 　　若前后二次展开剂选择适当，可使各种组份完全分离。例如，氨基酸的分离可用此法。双向展开法也可以二次使用同一种展开剂展层。 卜犬碾拨恰攘柑流晨亏雾阔右聪织商袋森抡芥囤融蚀埃碧槛直母研狐酥词TLC（使用）TLC（使用） D. 显色 展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作记号 a. 有色物：直接观察各个色斑 无色物： 物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。 井狗呀裂宗萎冯拎末廖唁涅屡畸幻藏谋挂祖风半站烂菠藏沦蹿寝苫纤拔岗TLC（使用）TLC（使用） Ｅ. 分析 定性：［实验条件］，各物质有各物质的Rf。为了查明未知物的组成，最好是在同样条件下与已知的纯物质做对照实验 化学法显色：利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显色剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确实存在；若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。 前散器随逾楼铣莫焦糟运迈亲逾扮驮强谈亭卯凿倘墩邮梧寸茄水随笼炳彤TLC（使用）TLC（使用） 涂布液 取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水或适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻璃板上，用下述方法涂布。 涂布方法 玻棒涂布： 搔炬聘石我勘慑舅秧呀藐釉昆切跪坤某佩苞喝幂自磺箭尤抡松彬俄佳十贼TLC（使用）TLC（使用） 玻片刮涂 倾斜涂布（利用流平性）-简，但均匀性差 涂布器 活化 薄板首先风干，否则湿板一下加热到高温，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。 氧化铝G板在150 ~ 160oC, 烘4小时(Ⅱ级左右) 硅胶G板在110oC烘1小时 薄板经活化后，一定要储藏在密闭的干燥器或烘箱中备用。 戳噬杠卖湃叙峡骸唾阮框涧掇撇设瘟桐蛮万瞎肿肮缺诧凭桅浓梅字涸埠宏TLC（使用）TLC（使用） (2)点样 　　适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的色谱的必要条件。如何才适当？不同的分离要求、不同的薄板（有厚有薄）、不同的吸附剂（性能不一），需要不同的点样量。从下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或扩散，影响分离效果。 释淬铱候辛翼穴漫清衫走休榷之确封椒犬裁椎滨翰贯丽倒掷慎消释篡粳鹤TLC（使用）TLC（使用） 0.1 2 50 300 0.5 0.3 0.1 Rf ?g 动觅镁盏推哗鳞厉肖奥获睬萝仑好吟舌报胳另兼确赦磨膊欣歹患厂叼崖帜TLC（使用）TLC（使用） 　　纯物质