屈膝点按叩揉法调控l 型电压依赖性钙通道影响软骨细胞 - 天津中医药.pdf

天 津 中 医 药 ２０ 17 年4 月第34 卷第4 期 262 Ｔｉａｎｊｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Apr. ２０ 17熏Ｖｏｌ ．34 Ｎｏ ．4 DOI ：10.11656/j .issn.1672-1519.20 17.04.15 屈膝点按叩揉法调控L 型电压依赖性钙通道 影响软骨细胞代谢的机制研究* 1，2 1 王一洲 ，赵 强 （1.天津中医药大学，天津 300 193 ；2.天津市中医药研究院附属医院，天津 300 120 ） 摘要 ：[ 目的] 通过分析屈膝点按叩揉法调控L 型电压依赖性钙通道影响软骨细胞合成代谢，探讨该手法防治膝 骨性关节炎（KOA ）的分子机制。[方法] 50 只新西兰大耳白兔随机分成5 组，运用Hulth 造模法构建KOA 兔模型，治 疗组采用屈膝点按叩揉法治疗，阳性对照组采用关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗，正常组、假手术组及模型组同条件 饲养。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR ）和蛋白免疫印迹法检测L 型电压依赖性钙通道α1 亚基及 合成代谢相关蛋白的表达。[结果] 治疗组、阳性对照组Cav 1.2、Cav 1.3、Cav 1.4 、PTHrP 、Col Ⅱ蛋白的表达均高于模型 组，差异具有统计学意义（P＜0.05 ），治疗组Cav 1.2、Cav 1.3、Cav 1.4 、PTHrP 、Col Ⅱ蛋白的表达与阳性对照组相比无统计 学差异（P＞0.05 ）。[结论] 屈膝点按叩揉法通过影响L 型电压依赖性钙通道蛋白，增加细胞内钙离子浓度，上调甲状旁 腺激素相关蛋白（PTHrP ）的表达，进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用。 关键词 ：屈膝点按叩揉法；L 型电压依赖性钙通道；软骨细胞；代谢 中图分类号 ：R684.3 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-1519（2017）04-0262-04 膝骨性关节炎（ＫＯＡ ）是一种常见的退行性骨 具有整体调节的独特优势，基于此笔者运用屈膝点 关节疾病，软骨细胞在异常微应力环境中发生的肥 按叩揉法与关节腔玻璃酸钠注射治疗比较，分析屈 [1] 大、凋亡是该病的主要病理变化。研究发现 ，适当 膝点按叩揉法对软骨细胞合成代谢相关通路蛋白 的应力刺激能够维持软骨细胞结构、促进细胞合成 及L 型电压依赖性钙通道的影响，探讨该手法防治 [2] 代谢、降低细胞凋亡率。Browning 等 通过酶联免疫 KOA 的分子机制。 吸附法测定流体静压干预后体外培养的软骨细胞 1 材料和方法 中钙离子（Ca2+ ）浓度上升，而使用钙通道阻滞剂可 1.1 试剂 DMEM、胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素、 明显降低Ca2+浓度上升的速率。可见钙通道是软骨 链霉素（Gibco 公司，美国）；Ⅱ型胶原酶、（Sigma 公 细胞响应应力刺激的中介结构，目前已发现软骨细 司，美国）；RNA 提取试剂、反转录试剂盒、Real-time 胞具有L 型、P/Q 型电压依赖性钙通道蛋白亚单位 PCR 试剂盒、DNase 1、5×RNA Loading Buffer （Takara [3] Cav 1.2 ，Cav 1.3 ，Cav 1.4 ，Cav2.1 等表达 ，由钙通道引 公司，日本）。 发的Ca2+ 内流对甲状旁腺激素相关