转录因子ap 2beta和p53蛋白相互作用的研究.pdfVIP

第２６卷第２期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．２ 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１７年４月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ａｐｒ．２０１７ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１７．０２．０１６  转录因子ＡＰ２ｂｅｔａ和 ｐ５３蛋白相互作用的研究 王　琳，汤　婷，欧阳文英，粟　敏 （湖南长沙医学院基础医学院，湖南长沙４１０２１９） 摘　要： 转录因子ｐ５３与ＡＰ２基因家族成员ＡＰ２ｂｅｔａ发生突变后，均会导致个体出现相应的疾病。本文首先 利用两个重组质粒ｐＣＭＶＨＡｐ５３和ｐＭｙｃＡＰ２ｂｅｔａ，转染永生化的胚胎肾细胞 ＨＥＫ２９３（野生型），在细胞中表 达相应蛋白质。通过免疫共沉淀实验证明ＡＰ２ｂｅｔａ和ｐ５３蛋白在体内可以相互作用。并将梯度增加的ｐＭｙｃ ＡＰ２ｂｅｔａ质粒及等量ｐＣＭＶＨＡｐ５３质粒转染到ＨＥＫ２９３细胞，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳实验证明ＡＰ２ｂｅｔａ能 正向调控ｐ５３蛋白的表达。为了进一步探讨 ＡＰ２ｂｅｔａ与ｐ５３的作用机制，利用蛋白质合成抑制剂 ＣＨＸ（ｃｙｃｌｏ ｈｅｘｉｍｉｄｅ）处理转染了ＡＰ２ｂｅｔａ与ｐ５３表达质粒的细胞，实验结果说明，ＡＰ２ｂｅｔａ能增加ｐ５３蛋白的稳定性来调 控ｐ５３的表达。 关键词： ＡＰ２ｂｅｔａ；ｐ５３；蛋白稳定性 中图分类号： Ｑ７５ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１７）０２０１８９０５ ＡＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ ＡＰ２ｂｅｔａａｎｄｐ５３Ｐｒｏｔｅｉｎ ＷＡＮＧＬｉｎ，ＴＡＮＧＴｉｎｇ，ＯＵＹＡＮＧＷｅｎｙｉｎｇ，ＳＵＭｉｎ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈａｎｇｓｈａＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０２１９，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅｍｕｔａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｐ５３ａｎｄＡＰ２ｂｅｔａｗｈｉｃｈｉｓＡＰ２ｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒｗｉｌｌｒｅｓｕｌｔｉｎｉｎｄｉ ｖｉｄｕａｌｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅｕｓｅｏｆｔｗｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓｐＣＭＶＨＡｐ５３ａｎｄｐＭｙｃＡＰ２ｂｅｔａｔｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｍｍｏｒｔａｌ ｉｚｅｄｅｍｂｒｙｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌｓＨＥＫ２９３（ｗｉｌｄｔｙｐｅ）．ＣｏｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＡＰ２ｂｅｔａａｎｄｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎｓｍａｙｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｖｉｖｏ，ＡｎｄｔｈｅｎｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐＭｙｃＡＰ２ｂｅｔａａｎｄｔｈｅｓａｍｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｌａｓｍｉｄｐＣ ＭＶＨＡｐ５３ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏ