木质素降解菌dj02筛选与鉴定.pdfVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　２０１７（０３下）：１８３－１８６ 木质素降解菌 ＤＪ０２筛选与鉴定 姜立春，刘　羽，赵丽萍，林寿露，阮期平 （绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室，四川绵阳６２１０００） 中图分类号：Ｑ９３９．９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１７）０３－０１８３－０４ 关键词：木质素；酶活；不动杆菌属；１６ＳｒＤＮＡ；系统发育分析 摘　要：为了筛选高效降解木质素菌株，试验以牛粪及其下面土壤中降解木质素的微生物进行研究， 以期获得一些高酶活的木质素酶产生菌。试验采用分离培养方法以苯胺蓝为唯一碳源的培养基进行 显色反应，对真菌进行１６ＳｒＤＮＡ序列的扩增与检测，并与获得的１６ＳｒＤＮＡ序列进行比对与分析，构 建系统发育树。结果表明：该菌属于革兰氏阴性菌，呈杆状，硝酸盐试验阴性，动力阴性，生化氧化酶 阴性；菌株ＤＪ０２与不动杆菌属的菌株聚为一簇，与Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．ＤＢＰ－３（ＪＮ３１４４３６）菌株在同一 分支中，且１６ＳｒＤＮＡ核苷酸序列相似性最高为９９％以上，因此命名为Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．ＤＪ０２。这将为 该菌株的进一步优化和木质素的生物降解提供试验依据。 ［１２］ 　　目前，煤、石油、天然气等化石资源至今仍是燃料 白腐菌研究比较广泛 。 和化工利用的主要来源，但煤、石油、天然气等化石资 　　本研究旨在从微生物丰富的粪便及其下面土壤 源再生极其困难，因此开发新的化工资源迫在眉睫。 中分离筛选出具有高效降解木质素能力的菌株，并对 生物质是由植物通过光合作用把太阳能固定于地球 其形态特征、培养特性与生理生化特征进行观察和测 上的有机物，具有洁净、可再生、可储存和可运输的特 定，并结合１６ＳｒＤＮＡ序列分析比对及构建系统发育 点，是唯一可直接转化为液体燃料和化学品的可再生 树对该菌株进行初步鉴定，从而为对木质素菌株的生 资源。木质纤维素作为生物质的主体部分始终是被 物降解能力的进一步深入研究奠定基础。 ［１］ １　材料 关注的焦点 。木质素是一种复杂的非结晶性的三 维网状酚类高分子聚合物，与纤维素、半纤维素等一 １．１　菌种 ［２］ 　　使用无菌取样铲采集校园周边农户牛粪及其下 起构成植物的主要骨架 。一般认为，木质素主要 含碳、氢、氧三种元素，质量分数分别约为６０％、６％ 面的土壤作为筛选菌源，用无菌袋包装带回实验室， ［３］ 于４℃冰箱中保存，备用。 和３０％，此外还有０．６７％左右的氮元素 。基本结 构单元是苯丙烷，共有三种基本结构，即愈创木基丙 １．２　试剂 ［４］ 　　ＰＣＲ扩增试剂盒、ＤＬ－２０００Ｍａｒｋｅｒ、Ｔ载体，宝 烷、紫丁香基丙烷和对羟苯基丙烷 。目前自然界 参与降解木质素的微生物有真菌、放线菌和细菌，真 生物工程（大连）有限公司生产；ＤＮＡ胶回收试剂盒 ［５］ （Ｏｍｅｇａ）、氨苄青霉素（批号为 １３０６１０）、琼脂糖、Ｔ 菌是其中最主要的一类 。目前已经有物理、化学、 载体、５－溴 －４－氯 －３－吲哚 － －Ｄ半乳糖苷 生物三个方面的方法降解木质素，化学方法主要有酸 β ［６］ （Ｘ－ｇａｌ）、异丙基 － －Ｄ硫代半乳糖苷（Ｉ