ph调控双水相萃取色素蛋白复合体及其分配行为研究.pdfVIP

天然产物研究与开发 NatProdResDev2016，28：661-667，684 文章编号：1001-6880(2016)5-0661-08 pH调控双水相萃取色素蛋白复合体及其分配行为研究 唐雯熙 2，张晓蓉 ，段 静 ，吴湘霞 。吉首大学生物资源与环境科学学院；吉首大学植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，吉首416000 摘 要：为发展色素蛋白复合体分离纯化新方法，探究pH调控PEG1000／柠檬酸钾双水相系统萃取分离纯化色 素蛋白复合体。优化萃取条件，光谱法研究其分配行为，检测产物纯度和生物活性。结果表明，最佳萃取条件 为调节pH9．0，相组成c眦looo19．0％／C拧檬酸钾20．0％，蛋白质加量3．42mg／g，K和萃取率达到最大，分别为 8．8 及 86．0％。响应面分析法揭示，PEG1000和柠檬酸钾质量浓度及 pH对分配系数和萃取率影响显著。调节 pH7．0，反萃取分配系数和反萃取率最小为0．15及86．6％。蛋白质总回收率为74．2％。pH对色素蛋白复合体 分配行为具有调控作用，pH大于8．5体系，色素蛋白趋于分配上相，反之分配于下相 ，PEG1000／柠檬酸钾 以及 蛋 白质加入量不影响色素蛋白复合体分配于上相。电泳表征发现，萃取(pH9．0)上相存在2个蛋 白质组分，相 对分子量 (MW)为7．0kD及 14．0kD。反萃取(pH7．O)使相对分子量7．0kD蛋 白质组分分配于下相 ，该组分为 LH2卢亚基，经萃取和反萃取产物生物活性稳定。pH可调控PEG1000／柠檬酸钾双水相系统萃取分离色素蛋白 复合体，产物纯度高，生物活性稳定。 关键词：色素蛋白复合体；双水相萃取系统；分离因素；萃取率；生物活性 中图分类号：R284．2 文献标识码：A DOI：10．16333／j．1001-6880．2016．5．004 pH RegulationofExtractionofPigmentProteinComplexesby AqueousTwo—phaseSystem andInvestigationofDistributionBehavior TANGWen—xi·，ZHANGXiao—rong ·，DUANJing ，WU Xiang—xia C‘ollegeofBOI-resourcesandEnvironmentScience，JishouUnive~ity；研 Laboratoryof PlantResourcesConservationand UtilizatoininHunanProvince，JishouUnive~ity，J~hou416000，China Abstract：Todevelopanovelpurificationmethodfortl1epigmentproteincomplexes(PPCs)，PPCswereseparatedand purifiedusingaqueoustwo-phasesystem(ATPS)ofpolyethyleneglycol(PEG)1000／potassiumcitratecontrolledbypH． Theextraction conditionofPPCswasoptimized．Th edistributionbehaviorof PPCsinATPSwas detectedbyUV—Vis spectroscopy，andthepuritynadbiologicalactiviytofproductwereinvestigatde．Th eresultsindicatde htattheoptimalex- tractionconditionwere19．O％(W／W)PEG1000，20．0％(w／w)potassiumcitrate，hteproteinsaddingamountwas 3．42ms／g，nad tllpH9．0．Undertheseconditions，htedistribu