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0542 毛细管电泳法1 毛细管电泳是指以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，根据供试品 中各组分淌度（单位电场强度下的迁移速度）和（或）分配行为的差异而实现分离的一种分 析方法。 当熔融石英毛细管内充满操作缓冲液时，管内壁上硅羟基解离释放氢离子至溶液中使管 壁带负电荷并与溶液形成双电层（ζ 电位），即使在较低pH 值缓冲液中情况也如此。当毛细 管两端加上直流电压时将使带正电的溶液整体地移向负极端。此种在电场作用下溶液的整体 移动称为电渗流（EOF ）。内壁硅羟基的解离度与操作缓冲液 pH 值和添加的改性剂有关。 降低溶液pH 值会降低解离度，减小电渗流；提高溶液 pH 值会提高解离度，增加电渗流。 有机添加剂的加入有时会抑制内壁硅羟基的解离，减小电渗流。在操作缓冲液中带电粒子在 电场作用下以不同速度向极性相反的方向移动，形成电泳，运动速度等于其电泳速度和电渗 速度的矢量和。通常电渗速度通常大于电泳速度，因此电泳时各组分即使是阴离子也会从毛 细管阳极端流向阴极端。为了减小或消除电渗流，除了降低操作缓冲液 pH 值或改变添加剂 2 的种类 之外，还可以采用内壁聚合物涂层的毛细管。这种涂层毛细管可减少大分子在管壁 上的吸附。 1. 分离模式 3 当以毛细管空管为分离载体时毛细管电泳有以下几种模式。 (1)毛细管区带电泳（CZE ） 将待分析溶液引入毛细管进样一端，施加直流电压后，各 组分按各自的电泳流和电渗流的矢量和流向毛细管出口端，按阳离子、中性粒子和阴离子及 其电荷大小的顺序通过检测器。中性组分彼此不能分离。出峰时间为迁移时间（tm ），相当 于高效液相色谱和气相色谱中的保留时间。 4(2)毛细管等速电泳（CITP ） 采用前导电解质和尾随电解质，在毛细管中充入前导电 解质后，进样，电极槽中换用尾随电解质进行电泳分析，带不同电荷的组分迁移至各个狭窄 的区带，然后依次通过检测器。 (3)毛细管等电聚焦电泳（CIEF ） 将毛细管内壁涂覆聚合物减小电渗流，再将供试品和 两性电解质混合进样，两个电极槽中分别加入酸液和碱液，施加电压后毛细管中的操作电解 质溶液逐渐形成 pH 梯度，各溶质在毛细管中迁移至各自的等电点（pI ）时变为中性形成聚 焦的区带，而后用压力或改变检测器末端电极槽储液的 pH 值的方法使溶质通过检测器。 5 (4)胶束电动毛细管色谱（MEKC ） 当操作缓冲液中加入大于其临界胶束浓度的离子型 表面活性剂时，表面活性剂就聚集形成胶束，其亲水端朝外、疏水非极性核朝内，溶质则在 水和胶束两相间分配，各溶质因分配系数存在差别而被分离。对于常用的阴离子表面活性剂 十二烷基硫酸钠，进样后极强亲水性组分不能进入胶束，随操作缓冲液流过检测器（容量因 子 k’=0 ）；极强疏水性组分则进入胶束的核中不再回到水相，最后到达检测器（k’=∞）。常 用的其他胶束试剂还有阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、胆酸等。6两亲性质的聚 合物，尤其是嵌段聚合物也会在不同极性的溶剂中形成胶束结构，可以起到类似表面活性剂 的作用。 7 （5 ） 亲和毛细管电泳（ACE ） 在缓冲液或管内加入亲和作用试剂，实现物质的分离。 如将蛋白质（抗原或抗体）预先固定在毛细管柱内，利用抗原-抗体的特异性识别反应，毛 细管电泳的高效快速分离能力、激光诱导荧光检测器的高灵敏度，来分离检测样品混合物中 能与固定化蛋白质特异结合的组分。 8 当以毛细管填充管为分离载体时毛细管电泳有以下几种模式。 (6)毛细管凝胶电泳（CGE ） 在毛细管中装入单体和引发剂引发聚合反应生成凝胶，如 聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等，这些方法主要用于测定蛋白质、DNA 等生物大分子。另 外还可以利用聚合物溶液，如葡聚糖等的筛分作用进行分析，称为毛细管无胶筛分。有时将 它们统称为毛细管筛分电泳，下分为凝胶电泳和无胶筛分两类。。 (7)毛细管电色谱 （CEC ）将细粒径固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂覆固定相， 或以聚合物原位交联聚合的形式在毛细管内制备聚合物整体柱，9 以电渗流驱动操作缓冲液 （有时再加辅助压力）进行分离。分析方式根据填料不同，可分为正相、反相及离子交换等 模式。 除以上常用的单根毛细管电泳外，还有利用一根以上的毛细管进行分离的阵列毛细管电 泳以及芯