Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响和相关基因的转录调控.pdfVIP

Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响及相关 基因的转录调控 摘 要 目的构建霍乱弧菌C7258菌株的^詹基因的缺失株和缺失回补株，分析Hfq蛋白对霍 乱弧菌环境适应能力的影响，验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。 源臂，搭桥PCR方法扩增将上、下游同源臂连接。搭桥PCR片段和自杀质粒pWM91 分别进行双酶切，之后用连接酶进行连接，获得重组自杀质粒Ayq．pMW91，转化 入大肠杆菌SMl0却ir株。采用同源重组方法，通过结合将自杀质粒△五向．pMW91 转入霍乱弧菌C7258菌株，利用庆大霉素和氨苄青霉素双抗平板和pWM91质粒的 sacB基因在蔗糖平板上杀死供体菌的方法构建霍乱弧菌C7258菌株的Yq基因的缺 接2酶切产物，转化入大肠杆菌SMl0 Xpir菌株中，获得重组克隆载体／Wq．C-pUCl8。 SDS．PAGE蛋白电泳。4．通过对野生株、突变株、回补株在富氧、缺氧、胆盐、M9 环境下的生长状态，从初始培养到平台期整个过程，每隔ld,时测定D600衄，重复三 次，用平均值绘成生长曲线，统计学方法比较差异；将野生株、突变株、回补株点 在Swim平板上，30℃培养24