教案郑红梅开题报告1.docVIP

开题报告 题 目 响应面法优化苋菜总黄酮提取工艺及抗氧化研究 学 院 生命科学与化学学院 姓 名 郑 红 梅 专 业 生 物 技 术 学 号 272020165 指导教师 周 向 军 提交日期 2011-3-13 天水师范学院毕业论文（设计）开题报告 姓名 学号专业 生物班级 0级（）班 指导教师 职称 职务 毕业论文（设计）类型 实验实践 论文（设计）题目 一、目的和意义 苋菜又名米苋，赤苋，彩苋，青香苋，雁来红等，系苋科苋属一年生植物苋之茎叶。苋菜按其颜色分为红苋，绿苋和红绿杂色三种。在我国南北各地均有栽培，是夏季的主要蔬菜之一。苋菜营养丰富，药食俱优[1]。对其营养成分的研究很多，但其黄酮含量的提取研究很少见。黄酮是自然界中广泛存在的化合物。现在已知的黄酮化合物有4000 多种，在植物体中常以游离态或与糖结合成苷的形式存在[2]。近年来对黄酮类化合物的药理作用有较多研究，发现其具有抗心脑血管病、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗过敏、免疫调节等作用[ 3 – 4 ]，在食品、医药、保健品等方面应用十分广泛。因其具有和脾、利水、止血、明目的功效, 常用于治疗产后出血、痢疾、水肿、肠炎、胃溃疡、感冒发热、目赤肿疼等症。本实验以乙醇浓度、液固比、提取温度及提取时间四个因素为影响因子，应用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型，以提取总黄酮作为响应值，利用响应面分析（RAS软件分析，优化提取工艺条件旨在为制订科学、经济的制备工艺提供实验参考二、国内外研究现状近年来，国内外对植物中黄酮类化合物的研究越来越深入，随着分子生物学、化学分析学等相关科学的相互渗透，对黄酮类化合物的提取及药理作用都有了很大进展，逐渐发现黄酮类化合物不仅是天然活性成分中极具应用潜力的资源之一，而且是低毒甚至无毒的药用成分，成为医学界的热门研究。关于总黄酮提取研究，笔者未见国内外文献报道响应面分析法是一种优化多变量系统的有效试验工具。它是研究因素与响应值之间、因素与因素之间相互关系的，并且克服了传统正交试验只能给出最佳因素水平组合，而无法找出整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值的缺陷。总黄酮响应面法总黄酮提取，为将来中试开发提供参考。 三研究方案黄酮的提取准确称取1.0g，置于100mL圆底烧瓶中,加入一定量乙醇溶液,在一定的温度、一定料液比提取一定的时间取出离心除杂上清液即得粗提液。 黄酮标准液的配制和标准曲线的制作精密称取经℃干燥至恒重的芦丁对照品mg，置mL量瓶中加%乙醇适量溶解并稀释至刻度摇匀得对照品液0.25mg/mL)。准确吸取标准液0mL，分别置25mL容量瓶中加5%NaNO2 1.0mL放置6min加10%AlNO3）31.0mL，放置6min加10%NaOH 10mL加50%乙醇至刻度摇匀放置15min以相应试剂作空白510nm波长处测定吸光度。 3、黄酮提取率的计算吸取一定体积的提取液置于试管中按以上方法操作测定吸光度按照标准曲线计算出黄酮质量并按下述公式计算黄酮提取率黄酮提取率(%)=提取的黄酮质量/粉质量×100%采用邻二氮菲-Fe2+氧化法、邻苯三酚自氧化法和普鲁士兰法分别测定其羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力和总抗氧化能力。提取物对羟自由基的清除作用采用邻二氮菲-Fe2+氧化法。吸取4ml pH7.4磷酸盐缓冲液，加入1.5ml 5mmol/L邻二氮菲，充分混匀。再加入1ml 7.5mmol/L FeSO4溶液，立即混匀。加入一定体积的某一浓度样液，立即混匀。加入1.5ml双蒸水，以补充体积。最后加入1.0ml 1%H2O2溶液，轻轻混匀。37℃水浴中保温60min，536nm测定吸光度。OH清除率(%)=（A加药－A损伤）/（A未损－A损伤）×100，式中：A加药为加入样品(抗氧化剂)及H2O2时测得的吸光度；A损伤为加H2O2而不加抗氧化剂时测得的吸光度；A未损为不加样品及H2O2时测得的吸光度。 提取物对超氧阴离子自由基的清除作用采用邻苯三酚自氧化法。取3支干燥的10mL试管, 分别加入(pH=8.3)Tris-HCl缓冲溶液4mL，在25℃水浴中恒温20min, 在1、2号试管中分别加入一定体积的黄酮提取液, 在2、3号比色管中分别加入4mmol/L邻苯三酚溶液0.5mL，将3支试管混匀，在25℃水浴中恒温4min，取出后在各管中加入8mol/L HCl 3滴, 混匀。以缓冲液为参比在320nm处测定吸光, 计算清除率P=A0-(A2-A1)/A0×10