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解说实验三、动物组织dna的提取
班级：动科1143 姓名：李胜浩 学号：201411331312 动物生物化学实验报告 ——动物组织DNA的提取 * 一．实验目的 掌握从动物组织中分离DNA的基本原理和方法。 二．基本原理 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白，能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。2.在0.1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋白的溶解度最小，仅为在纯水中的1%左右，而RNA核蛋白的溶解度最大；但在1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋白的溶解度却增大，至少是在纯水中的两倍，而RNA核蛋白的溶解度却明显下降。3.分离得到DNA核蛋白后，应进一步十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，用含有异戊醇的氯仿除去变性的蛋白质，以得到游离的DNA。4.DNA分子大而长，其水溶液呈粘稠状，可用玻璃棒搅缠起来。为了获得大的DNA分子，在试验中应尽量避免剧烈震荡、用力过猛。 * 三．实验器材与试剂 1. 0.15mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠溶液（PH7.0）:称取8.77g氯化钠、4.41g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解，调节pH值至7.0稀释至100ml。 2. 0.15mol/LNaCl-0.1mol/LEDTA-Na2溶液（PH8.0）:称取8.77g氯化钠、37.2g EDTA-Na2溶于800ml蒸馏水中，以0.1mol/L氢氧化钠调至PH8.0，最后定容至1000ml。 3. 5mol/L氯化钠：称取292.2gNaCl溶于800ml蒸馏水中，最后定容至1000ml。 4. 5%SDS溶液：称取5gSDS，溶至100ml的45%乙醇中。 5. 氯仿-异戊醇溶液：按氯仿?异戊醇=24?1（V/V）配制。 6. 95%乙醇，75%乙醇。 7. 组织捣碎机（或玻璃匀浆器），移液管，离心机，锥形瓶，天平，容量瓶，剪刀。 * 四、实验步骤 1.本实验以鸡或兔的肝脏为材料。实验前动物应饥饿12h以上。 2.称取肝脏4g，放在培养皿中，用剪刀剪碎，放入匀浆器研磨，加入6ml，氯化钠-柠檬酸钠缓冲液，装在10ml离心管中。将匀浆物在4000r/min下离心10min。 3.将上述沉淀转入50ml大试管中，加入6ml氯化钠-柠檬酸钠缓冲溶液、3ml氯仿-异戊醇混合液，0.5mlSDS使其终浓度为0.41%，手摇15min，然后缓慢加入氯化钠固体（有0.55g），使其终浓度为1mol/L。慢摇5min是氯化钠充分溶解。 4.将上述混合液在4000r/min离心15min，取上清液于50ml烧杯中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻璃棒的凝胶状物用滤纸吸取多余的乙醇，即得DNA粗品。 5.显色反应：取上述反应物2ml加入二苯胺试剂2ml沸水浴加热，观察颜色。 * 研磨匀浆 * 匀浆转入离心管 * 离心后的匀浆 *
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