大麻性别连锁的特异DNA标记的初步研究.pdfVIP

·182· 【论著] 大麻性别连锁的特异DNA标记的初步研究 宋书娟刘卉邵宏屉瑶 (北京大学臣学部生物遗传教研室，北京，100083) 摘要 阜簟寻找大麻性别连锁的特异DNA标记，为大嘛早期性别鉴别研究提供进…步研究基础。亨-击分别提取5 个旱和5q-0大麻干标本的基园组DNA．运用RAPD标记技术，分别用17个随机引物对取自我国不同地区的大麻 进行了检测。譬罩在引物OPX一09中发现l条长约820bp与旱性别连锁的特异带。譬誓该特异带可被用来作为性 别鉴别的特异性分子遗传标记。 关键词太麻；性别连锁；DNA标记；RAPD技术 大麻是最古老的栽培植物之一，在我国分布广 1．2DNA提取 泛，几乎遍及全国各地，皆以其作为纤维和油料作物 DNA提取方法为十六烷基三甲基溴化胺 而种植。大麻系中有些品种具有医用价值。但有很 强的依赖性潜力，是滥用最广泛的毒品之一，严重地 mmol·L1三羟甲基 危害着人类的健康和社会的安全。 乙二胺四乙酸(EDTA)，100 大麻为雌雄异株植物，据有关报道“1，雄性植株 的茎和叶中不含四氢大麻酚(THc)和大麻二醇 (CBD)或含量很少，雌性植株二者含量则相对较高，解于50“l三蒸水缓冲液以备聚合酶链反应 认为雌性植株具药用价值和滥用潜力。雄性植株的 (PCR)。 纤维质量明显高于雌性，因此大麻雄性檀株的培育 1．3PCR扩增 具有更安全的经济价值。然而大麻雌雄植株在幼苗 时期难以区分，只有当檀株开花后才能辨认。因此， 国MJ 为了正确利用大麻资源，进行大麻早期性别鉴别的 lO DNA，储备液稀释 p1，包括2plDNA(约20ng 研究具有重要意义。本文运用随机扩增多态性DNA (RAPD)方法．对我国不同地区大麻的雌雄植株进 行了检测．找到性别连锁的特异DNA标记，为大麻 验室)，0．4 早期性别鉴别研究提供进一步的研究基础。 QIAGEN公司产品)，1．0”l10×PCR缓冲液(100 mmol·LTris—HCI mmol·I，1 pH=8，3．500 1 mmol·L 1材料和方法 KCI，001％Gelatin和1．0 2) MgCl 1．1实验材料 为多年前取自云南、新疆、内蒙古、甘肃等地区 “1 20 的大麻干标本叶子。选取舍和旱植株各5株。 技术公司产品)。随机引物序列见表1。 表1用于PCR扩增反应的17个随机引物 2；!型二!塑 !￡垦蕴塑壁鳖壁蓥查i￡地!』堡!坚旦!E!型21塑!．!Q!1 183 PCR反应程序如下：92℃预变性3min，再运 另外．我们观察到650bp、550bp、450bp、350 行45个循环(94*(2变性30s，36℃复性30s．74℃延bp和150bp五条带(引物OPX—09)为所有样本共 伸1min)，最后74℃保温6min。