蓝莓SCoT标记分析体系的建立与优化 - 中国农学通报.PDF

中国农学通报 2014,30(25): 136-141 Chinese Agricultural Science Bulletin 蓝莓SCoT标记分析体系的建立与优化 1 2 2 1 韩国辉 ，龙治坚 ，范理璋 ，谭 平 1 2 （重庆市农业科学院果树研究所，重庆401329 ；西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳621010） 摘 要：为建立蓝莓SCoT 标记分析体系，为蓝莓的分子育种和遗传多样性分析等研究提供技术支持，以 5 2+ 蓝莓叶片为试材，采用L16(4 )正交设计方法，对影响蓝莓SCoT-PCR 反应的Mg 、dNTPs、TaqDNA 聚合 酶、模板DNA 及引物等因素进行优化筛选，建立了适用于蓝莓遗传分析的SCoT-PCR 扩增体系，即 20 μL 的反应体系中含有：Mg2 + 为2.813 mmol/L 、dNTPs 为0.100 mmol/L 、Taq酶为1.5 U 、Primer 为 0.2 μmol/L 、DNA 为10 ng 。应用优化的反应体系，对32 个SCoT 引物和6 个蓝莓品种( ‘Centurion ’、 ‘Premier ’、‘Homebell ’、‘ONeal ’、‘Tifblue ’、‘Misty ’)进行扩增，获得了条带清晰、稳定可靠的电泳结果。 关键词：蓝莓；目标起始密码子多态性；PCR ；正交优化 中图分类号：S663 文献标志码：A 论文编号：2014-1104 EstablishmentandOptimizationofSCoTSysteminBlueberry 1 2 2 1 HanGuohui,LongZhijian,FanLizhang,TanPing 1 (FruitResearchInstitute,ChongqingAgricultureScienceAcademy,Chongqing401329; 2CollegeofLifeScienceandEngineering,SouthwestUniversityofScienceandTechnology,MianyangSichuan621010) Abstract: Thestudy aimstoestablishanoptimalreactionsystemofSCoT-PCRinblueberryandprovide technical support for molecular breeding and genetic diversity analysis. Blueberry was used as material, orthogonaldesignmethodwasappliedtooptimizeSCoT-PCRamplificationsystemofblueberryinfivefactors 2+ suchasMg ,dNTPs,TaqDNApolymerases,templateDNAandprimersatfivelevels.AnoptimalSCo