附录III 显微鉴别法.PDF

附錄III 顯微鑒別法 附錄III 顯微鑒別法 顯微鑒別是指用顯微鏡對藥材的切片、粉末 、解離組織和表面製片中的組織 、 細胞或內含物等特徵進行鑒別的一種方法 。選取具代表性的藥材樣品，按下列 方法進行鑒別。 （1）橫切面及 / 或縱切面製片 — 選取具代表性的樣品，軟化 ，用徒手或滑走切 - 片法切成10 20 µm 的薄片。經甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他適合的 試液處理後 ，用顯微鏡觀察 。必要時可用蠟封包埋後切片。 （2 ）粉末製片 — 置粉末少量於載玻片上 ，攤平 ，用甘油醋酸試液、水合氯醛試 液或其他適合的試液處理後觀察 。 （3）表面製片 — 將樣品濕潤軟化後 ，切取一部分或撕取其表皮 ，加適合的試液 處理後觀察 。 （4 ）解離組織製片 — 將樣品切成厚約2 mm 的小片 ，然後按藥材材料的性質 ， 用以下其中一種方法進行組織解離 ︰ （a ）氫氧化鉀法 — 置樣品於試管中，加5% （v/v ）氫氧化鉀溶液適量 ，加 熱直至用玻璃棒擠壓能將殘渣離散為止 。傾去鹼液 ，加水洗滌後 ，取 出少量解離組織置載玻片上 ，用解剖針撕開，以稀甘油裝片觀察 。 （b ）硝鉻酸法 —置樣品於試管中，加入硝鉻酸試液適量 ，放置直至可用玻 璃棒容易壓散為止。傾去酸液，加水洗滌後，依照上述4 （a ）所示裝片。 （c ）氯酸鉀法 — 置樣品於試管中，加50% （v/v ）硝酸溶液及氯酸鉀少量 ， 緩緩加熱 ，至產生的氣泡緩和時 ，再加入氯酸鉀少量 ，使氣泡穩定地 產生 。當組織傾向離解時 ，用玻璃棒將之分離 。傾去酸液 ，加水洗滌 後 ，依照上述4 （a ）所示裝片。 藥材樣品含少量或呈分散狀的木質組織或薄壁細胞組織 ，可用氫氧化鉀法進行 測試 。而主要含木質組織或木質組織群束的堅硬樣品，則可用硝鉻酸法或氯酸 鉀法。 A-6 附錄III 顯微鑒別法 （5）細胞及其細胞內含物大小的測量 — 在顯微鏡下測量樣品細胞及內含物的大 小時 ，可用目鏡測微尺測量 。將目鏡測微尺裝入目鏡內，用鏡台測微尺標 化 。標化時 ，轉動目鏡 ，移動鏡台測微尺 ，使兩種量尺的刻度平行 ，左邊 的“0”刻度重合 ，再找第二條重合刻度 。 根據兩條重合刻度間兩種量尺的小格數 ，計算出目鏡測微尺每小格在該物 鏡條件下所相當的大小 （微米）。 測量時 ，以目鏡測微尺測量目的物的小格數 ，乘以每一小格的大小值 （微 米）。通常是在高倍物鏡下進行 ，測量較長的纖維如非腺毛等的長度時 ，則 以在低倍物鏡下測量較為方便 。 記錄最大值與最小值 （微米），可允許有少量略高或略低於各藥材品種項下 規定的數值 。 （6）細胞壁性質的檢定 - （a ）木質化細胞壁 — 加間苯三酚試液1 2 滴 ，稍放置 ，然後加鹽酸1滴 ， 根據木質化的程度 ，木質化細胞壁顯紅色或紫紅色。 - （b ）木栓化或角質化細胞壁 — 加蘇丹III 試液1 2 滴 ，稍放置數分鐘或微微 加熱 ，木栓化或角質化細胞壁顯橘紅色或紅色。 （c ）纖維素細胞壁 — 加 - 氯化鋅碘試液1 2 滴 ，稍放置數分鐘 ；或加碘試液 - 1 2 滴後 ，稍放置 ，然後加66% （v/v ）稀硫酸溶液。纖維素細胞壁顯藍 色或紫色。 - （d ）硅質化細胞壁 —加硫酸1 2 滴 ，無變化。 （7 ）細胞內含物性質的檢定 （a ）澱