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维普资讯 浙江大学学报(农业与生命科学版) 31(3)：277～282，2005 JournalofZhejiangUniversity(Agric． LifeSci．) 文章编号 ：1008-9209(2005)03—0277—06 百 山祖冷杉的 ISSR分析优化和遗传 多样性初步研究 哀建 国 。，邱英雄 ，余久华。，陈小荣。，丁炳扬 (1．浙江大学 生命科学学院，浙江 杭州 310029；2．浙江林学院 生命科学学院，浙江 I临安 311300； 3．百山祖 自然保护区，浙江 庆元 323800；4．温州师范学院 生命与环境科学学院，浙江 温州 325027) 摘 要 ：以百山祖冷杉 DNA 为材料 ，分析 了DNA浓度 、Mg 浓度 、dNTP浓度 、Taq酶的含量 以及退 火温度时 ISSR—PCR扩增结果的影响，经过优化实验建立 了百山祖冷杉 ISSR-PCR最佳反应体系．25 L 的PCR反应液舍有的组分和终浓度 分别 为：约 4Ong模板 DNA，1．2U q酶，0．4I*mol／L引物，1．5 mmol／LMgC12，0．2mmol／IdNTPs，2 去 离子 甲酰胺 ．利用优化反应体 系从 1OO个 ISSR 引物 中，筛选 出了13个稳 定性 高 、重复性好 的引物 ，对 4O个百 山祖冷杉个体材料 的DNA进行正式扩增 ，共扩增得到 91条带，其 中39条为多态性条带，多态住点百分率 (PPB)为 42．86 ．百山祖冷杉的3个群体遗传多样 性 比较分析表 明，人 工辅助授 粉产生的实生苗群体 (PPB一37．36 )遗 传 多样性 明显 高于老树群体 (PPB一16．48 )和嫁接苗群体 (PPB=20．88 )，这说明了人工辅助授粉繁 育措施能有效提高百山祖 冷杉 的遗传变异水平 ． 关 键 词：ISSR；优化；遗传变异；百山祖冷杉 中图分类号：Q16 文献标识码 ：A AIJian—guo一．QIU Ying—xiong ，YU Jiu—hua。，CHENXiao—rong。，DING Bing—yang (1．Collegeof LfeSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China 2．LfeScienceCollege，Zhejiang ForestryUniversity，Linan，Zhejiang 311300，China；3．Baishanzu NatureReserve，Qingyuan， Zhejiang323800，China；4．SchoolofLifeandEnvironmentalScience，WenzhouNormalCollege， Wenzhou，Zhejiang325027，China) Optimizationofintersimplesequencerepeats(ISSR)analysisasappliedtopreliminarystudyofgenetic variationinAbiesbeshanzuensisM．H．Wu．JournalofZhejiangUniversity(Agric． LireSci．)，2005， 31(3)：277-282 Abstract：FactorswhichaffecttheISSR analysisOfAbiesbeshanzuensis，such asannealing temperature and concentrationsoftemplateDNA ，TaqDNA polymerase，Mg anddNTP，etc．wereexamined．The optimalISSR-PCR reactionsystem (25I*I)inourexperimentswasasthefollowing：1× Taqbuffer，40 ngtemplateDNA，1．2 U TaqDNA polymerase，0．4／lmol／L primer