b细胞培养的阶段对超低温保存效果影响很大实验表明.PPT

第十章 植物种质的超低温保存 种质资源是物种进化和植物育种工作的基础，也是人类赖以生存的基本条件之一。由于自然环境变化和人为因素的影响，天然资源屡遭破坏，其中一些珍稀植物已经消失或濒临灭绝，天然资源受到严重威胁。因此，收集和保护种质资源是全世界都必须重视的紧迫工作。 目前常用的种质保存方法有以下几类： （1）种子保存 特点：传统的种质资源保存的主要方式 种子保存占用空间少，保存期较长 易干燥、包装和运输 因此种子在低温下长期保存是防止良种衰变的一条重要途径。 但是，随着储藏时间的延长，种子生活力逐渐下降，而且易受病虫鼠害侵袭。 此外，这种方法对于无性繁殖的种类等不适用。 （2）种植保存 特点：占地多，管理费用高， 需要投入较多的人力、物力 容易受自然灾害等影响 因此已经不适应目前种质资源保存的需要和土地资源紧缺的现状。 ? （3）离体保存 特点：占用空间少，无病虫害和病毒侵袭 在必要时可迅速大量增殖植物 无病毒，便于国际交流 但是，在正常条件下的植物细胞和组织的培养过程中，不断的继代培养会引起染色体和基因型的变异，可能导致培养细胞的全能性消失，失去形态发生的潜能；另一方面，一些具有特殊性状的细胞株系，也有可能在继代培养中丢失这些宝贵的性状，而且不太经济。 10.1抑制外植体生长的离体保存方法 10.2离体植物材料的超低温冰冻保存技术 10.1 抑制外植体生长的离体保存方法用于抑制生长的外植体可以是茎段，茎尖和愈伤组织等。常用的抑制生长的方法有以下几种： 10.1.1降低温度 10.1.2降低环境中的含氧量 10.1.3使用生长延缓剂 10.1.4其他方法 降低温度是抑制生长最常用的方法。 a.种质外植体在非冻结的低温下，老化速度减慢，因而可使继代间隔时间延长。 例如：通过每年转换一次新鲜培养基，在9℃下把葡萄小植株保存15年之久，而在正常条件下，需1~3个月转移一次。b.若某个品种当前需求量不大，但以后有推广的可能性，就可以把它们的培养物置于冰箱里，可以节省连续培养或重新培养所需的时间和经费等。c.降低温度是减缓植物组织细胞生长最简单有效的方法 10.1.1降低温度 10.1.2降低环境中的含氧量降低环境中的氧含量可以达到抑制生长的目的。a.低气压处理是通过降低培养物环境的大气压而使所气体的分压都有降低。b.低氧分压处理是在正常气压下，加进氮气等惰性气体，使其中的氧分压降到较低水平。c.用矿物油覆盖，也使供给培养物的氧气含量降低，延缓生长。 10.1.3使用生长延缓剂在培养基中添加生长延缓剂能有效减缓材料的生长。a.不同抑制剂对不同植物材料的作用效果有所差异b.同一种抑制剂应用在不同植物中，要达到抑制作用而不对植物造成伤害所需要的浓度也有所不同。c.在一种植物上有效地抑制剂在另一种植物上则可能无效。实验已经证明，利用多效唑可以使玉米、水稻、小麦和马铃薯等的试管苗生长素率降低，同时移栽成活率提高。利用二甲基氨基琥珀酰胺酸（B9）、矮壮素（CCC）可以使葡萄试管苗的转管从3个月一次变为一年一次。如果将低温保存与一些生长抑制剂配合使用，则效果更佳。 10.1.4其他方法a.通过降低基本培养集中的培养成分或从培养基中减去一两种营养元素，可使培养物生长受到限制。b.在培养基中添加一些高渗物质，如蔗糖、甘露醇等，造成一定的水分逆境也可减弱代谢活动，延缓细胞生长。c.高渗配合低温也有良好效果，可以显著延长种质保存时间 10.2离体植物材料的超低温冰冻保存技术 10.2.1材料的选择 10.2.2材料的预处理 10.2.3冰冻保护剂预处理 10.2.4降温冰冻操作 10.2.5化冻操作 10.2.6化冻材料的活力检测 10.2.7超低温种质保存实例 10.2.1材料的选择植物材料的种类、基因型、年龄、生理状态、抗寒性和形态结构等都对冷冻保存效果有很大影响。a.一般细胞分裂旺盛、体积小而原生质浓厚的分生细胞或比体积大而高度液泡化的细胞有利于超低温保存。b.细胞培养的阶段对超低温保存效果影响很大。实验表明，当培养细胞处于旺盛的对数分裂期时，抗冻能力和存活率较高。c.选用悬浮培养细胞，应先转移到新鲜培养基上培养几天，使较多的细胞处于对数分裂期的幼龄状态。 d.材料大小也有影响，太大影响