用比色法快速测定反刍动物瘤胃液中的氨氮浓度.pdfVIP

内蒙古畜牧科举 ·专题报告 · 用比色法快速测定反刍动物瘤胃液中 的 氨 氮 浓 度 王洪蒙 冯宗慈 卢德勋 (内蒙古畜牧科学院) 反刍动物瘤 胃被中氨氨含量是反映其{窗胃代谢和微生态环境状况的重要指标之一，利用 这一指标对反刍动物进行氮的营养检测是现代动物营养学中采用的重要手段之一。以前一般 采用康维(Conway)微量等温蒸馏滴定法和氨气敏 电极法测定氨，这两种方法操作较复杂， 适用在实验室 内进行测定，而生产上需要在现场进行迅速测定 ，因样品数量较大，往往牧场 又不具备设备条件，样品得不到及时分析，而瘤 胃液又不易长期贮存。对此，就需要有一种 新的方法来代替以上的分析方法 我们根据Stephenson提出的主 要方法，结合两年来的现 场测试实践，并加 以补充和完善而形成一种方法，供大家在测试工作 中参考。 这种方法以Berthelot反应为基本原理，具有操作简便、快速等优点，适用于在现场进行 瘤 胃液氨氨的批量测定 。 一 化学原理 该法主要依据瘤 胃液中氨在盐酸溶液中被转化为NH 离子，与二分子的苯酚作 用形成 靛酚有色复合物的显色反应 参加反应的苯酚是由亚硝基铁氰化钠和水扬酸钠作用生成的。 稽 胃液中存在的强还原物质对显色反应有干扰作用，可被由二氯异三聚氰酸 (DCI)在碱性 溶液中产生的次氯酸根氧化除去，高浓度水扬酿钠也会消除瘤胃液中存在酚类化台物对显色 反应的影响。由于反应中水扬酸钠和二氯异三幕氰酸是过量的，因此，显色反应程度大小完 全取决于癌 胃液中氨的浓度。其 反应过程简述如下 N 十H’ NH：+cf + 鼓》 o．? 一 三三 三一o№ =、试 剂 I．A溶液 (水扬酸钠 ／亚硝基铁氰化钠) 。0 I容量瓶中先加入80～9oml~ ，然后溶解 4g水扬酸钠，定容到1。Om1，在上 ? 5 · 内蒙古畜牧科学 。专题拉— · 述100ml水扬酸钠溶液 中再溶解0．0$g亚硝基 铁氰化钠 ，即为A溶液 。 2．B溶液 (氢氧化钠 ／二氯异三聚氰酸)： 先溶解1．2g氢氡 ／．~ 5=1oomI蒸馏水中．即为0．aM NaOH溶液。再往上 述lO0mlNaOH 溶液中溶解0．5g二氯异三聚氰酸 ‘(UCI)，即为B溶液 3．0．2M盐酸溶液 ： 在1升容量瓶中先加入少量蒸馏水，然后加入18mI敞盐酸，用蒸馏水定容到刻度。 4．氯化铵标准溶液 ； ①精确称取干燥氯化铵 (A．R．)O．382g，用0．2M盐酸溶液溶解后转 入10Oml容 量 瓶 中，再用0．2M盐酸加入刻度 ，放入冰箱可保存半年 。 ②用移液管吸取上述氯化铵标准液2Oral，加入100ml容量瓶中，再用蒹溜水稀 释 到100 131l刻度，即为工作液。 三、操作过程 1．标准系列比色管： 在顺序号为O～i1的各试管中依次加入氯化铵工 作踱0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10ml，再依次加入蒸馏水10、9、8、7，6、5、4、3、2、1，0ml，然后在 各试 管 中加 入 0．2M盐酸溶液10ml，充分摇匀。那么 ，各试管 中的氨氮浓 度 依 次 为0、2、4、6、8、10、 12、14、16、18、20rag／100ml。从上述各试管巾吸取0．2ml溶液，分别加入编号为O～ l1的各 比色管中 (规格为1×10cm)，再往各比色管加2,1mlA溶液和lml