基因组RNA的复制.pptVIP

第三十八章 基因组RNA的复制 提纲 依赖于RNA的RNA合成 双链RNA病毒的RNA复制 单链RNA病毒的RNA复制 以DNA为中间物的RNA复制 逆转录病毒的RNA复制 逆转座子 端聚酶催化的逆转录反应 某些DNA病毒生活史中的逆转录现象 依赖于RNA的RNA合成 RdRP主要由病毒基因组编码，有的还需要宿主细胞编码的辅助蛋白 合成的方向总是5′→3′ 绝大多数在模板的一端从头启动合成，少数需要合成引物 属于易错、高突变合成 对放线菌素D不敏感，但对核糖核酸酶敏感 复制的场所绝大多数在宿主细胞的细胞质，少数在细胞核 逆转录病毒的发现 上世纪60年代，Howard Temin观察到某些RNA病毒的复制和增殖受到DNA复制和转录的抑制剂——放线菌素D的抑制，于是他大胆地推测到这些病毒的生活史中有DNA中间物的存在或者有从RNA到DNA的逆转录过程。 1970年，Temin和David Baltimore 各自从RNA肿瘤病毒中纯化到催化以RNA为模板合成DNA的逆转录酶，为逆转录现象的存在提供了最直接的证据。Termin和Baltimore的发现使“中心法则”不得不进行修改，加上了逆转录内容。 逆转录病毒与癌基因 所有的RNA肿瘤病毒都是逆转录病毒 RNA病毒中的癌基因是宿主细胞正常癌基因的变化形式 逆转录病毒的例子： 劳氏肉瘤病毒（RSV） 猫白血病病毒 小鼠乳房癌病毒 艾滋病毒（HIV） 逆转录病毒的RNA复制 逆转录病毒的结构 逆转录病毒的生活史 附着与融合 核心颗粒释放和逆转录 原病毒DNA进入细胞核 整合 转录及后加工 转录物输出到细胞质 翻译及翻译后加工 新病毒装配和出芽释放 逆转录病毒的基因组RNA的结构 逆转录病毒的基因组RNA等同于一个全长的病毒mRNA，其非编码序列包括5端的帽子结构、5端的末端直接重复序列（R）、5端特有的序列（U5）、引物结合位点（PBS）、剪接信号、引发第二条链合成的多聚嘌呤区域（PPT）、3 端的多聚腺苷酸尾巴、3 端特有的序列（U3）和3端的末端直接重复序列。编码序列通常含有3个结构基因，它们是编码MA、CA和NC的gag基因，编码逆转录酶、整合酶和蛋白酶的pol基因以及编码SU和TM的env基因。如果是肿瘤病毒，还含有编码癌蛋白的癌基因onc。 HIV-1 基因组 双倍体：每一个拷贝的RNA大小= 9 749 nt tRNALys引物与每一个RNA结合 5′-帽子+3’-Poly A尾巴；编码9种蛋白质 帽子-R-U5-PPT-(10个ORF)-U3-R-Poly A 原病毒 (2XDNA) 的LTR: U3-R-U5 = 634 bp U3 = 453bp R = 98bp U5 = 83bp HIV的附着与融合 这是由受体和辅助受体介导的病毒颗粒外被与宿主细胞膜先特异性附着、后融合的过程。作为受体和辅助受体的分别是CD4蛋白和趋化因子受体—CCR5或CXCR4，而配体是病毒表面糖蛋白gp120和gp41。 HIV的宿主细胞主要包括：CD4-T淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞，这些细胞都含有CD4蛋白和趋化因子受体。 核心颗粒释放和逆转录 当HIV-1外被与宿主细胞膜融合以后，由衣壳包被的基因组RNA进入细胞质，随后在与基因组RNA结合的逆转录酶的催化下开始逆转录。 逆转录病毒 逆转录酶的结构与功能 具有三个酶活性：（1）5→3 的依赖于RNA的DNA聚合酶活性，该活性用来催化负链DNA的合成；（2）核糖核酸酶H活性，该活性用来水解tRNA引物和基因组RNA；（3）5 →3 的依赖于DNA的DNA聚合酶活性，该活性用来合成正链DNA。 逆转录酶的聚合酶活性与其它聚合酶一样位于由三个结构域折叠成的“手掌-手指-拇指” 模体之中，但核糖核酸酶H活性位于另外一个结构域之中。 原病毒DNA进入细胞核 逆转录产生的原病毒DNA单独并不能进入细胞核，它先需要与病毒蛋白VPR、MA和IN一起组成核蛋白的形式，然后在位于IN上的细胞核定位信号（NLS）的指导下通过核孔进入细胞核，此外，在逆转录过程中形成的一小段三链病毒cDNA上的中央翼式结构在其中可能也起一定的作用。 原病毒DNA的整合 整合是病毒cDNA与宿主染色体DNA的共价连接，整合位点是随机的。整合的病毒cDNA将成为受感染细胞的永久性遗传物质，它随着宿主DNA的复制而复制，从而传给子细胞。 具体的整合反应是：整合酶首先在距离两端LTR3-端2个核苷酸的位置切开LTR丢掉2个核苷酸，产生隐缩的3-端，同时在宿主细胞的DNA上交错切开，然后将原病毒DNA隐缩的3-端和宿主细胞DNA突出的5-端连接起来。最后由宿主细胞内的修复系统将空缺填补，完成整合过程。 转录及后加工 HIV的转录是在宿主细