医学免疫学试验指导.doc

医学免疫学实验指导 （供医学、药学专业使用） 青海大学 2008年1月 目 录 实验室规则 4 实验一 显微镜的结构与使用 4 实验二 白细胞的吞噬及溶菌酶试验 7 一、小吞噬试验(中性粒细胞吞噬功能试验) 8 二、大吞噬试验 8 三、溶菌酶测定 9 实验三 巨噬细胞（白细胞）移动抑制试验 9 实验四 硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验 11 实验五 凝集反应 12 一、玻片凝集试验 12 二、人类ABO 血型鉴定试验（玻片法） 13 三、试管凝集反应 14 四、间接凝集试验 15 五、间接乳胶凝集抑制试验 16 实验六 沉淀反应 17 一、琼脂扩散试验 18 二、免疫电泳 20 三、火箭免疫电泳 20 四、对流免疫电泳 22 实验七 补体的溶细胞作用 23 实验八 补体结合试验 24 一、溶血素单位滴定 24 二、补体单位滴定 24 实验九 血清补体活性测定 27 实验十 淋巴细胞转换试验 29 实验十一 玫瑰花环形成试验 31 实验十二 变态反应试验 32 一、豚鼠过敏试验 33 二、皮肤超敏反应 33 实验十三 免疫浊度试验 34 实验十四 循环免疫复合物的检测 35 实验十五 免疫标记技术 37 一、酶联免疫吸附试验 37 二、酶免疫组化技术 38 三、酶标免疫定量测定 40 四、免疫荧光技术 41 五、斑点金免疫渗滤试验 43 六、斑点免疫层析试验 44 实验室规则 实验前预习实验，进入实验室应穿白大衣，离开时将白大衣脱下并反折叠实验保持安静，大声喧哗实验室内禁止吸烟食及水电不得将实验物品私自带出实验室。 1.器材：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 2.标本：细菌革兰染色玻片标本、普通变形杆菌24h内培养液、啤酒酵母新鲜培养的活标本。 【内容和方法】 一、普通光学显微镜的结构和使用方法 微生物是肉眼看不见而必须借助于光学或电子显微镜将其放大数百乃至数万倍才能观察到的微小生物，因此显微镜是认识和研究微生物最重要和最基本的工具之一。因此，掌握其使用方法是进行微生物研究的基本技能。 1.普通光镜的基本结构 普通光镜无论其外观形状如何，它都由两大部分组成，即机械装置部分和光学系统部分。机械部分包括镜座、镜臂、载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘以及升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头、调节物象焦距、搁置和移动标本。光学系统包括反光镜、聚光器、物镜和目镜。它的作用是收集光源并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像映与眼帘，是肉眼本不能分辨的物体得以清楚观察（图1-1）。 光学系统是光学显微镜的核心部分，而物镜又是其中最重要的部件。一般的光镜配有3-4个物镜，有10倍的低倍镜、40倍的高倍镜和100倍的油浸镜（有的配有一个4倍的物镜头）。标本的放大主要靠物镜。为了使用方便，常用红、黄、蓝、白的色圈分别标记物镜倍数。另外，在镜头上还刻有一些符号和数值，低倍镜上刻有10/0.25、160，10指放大倍数，0.25指镜口率（N.A），160表示镜筒长度（mm）。高倍镜刻有40/0.65和160/0.17，40为放大倍数，0.65指镜口率，160表示镜筒长度，0.17则表示使用时所要求盖玻片的厚度。油镜上刻有100/1.25和160/0.17，该数值也表示放大倍数、镜口率、镜筒长度、盖玻片厚度，除此之外，油镜头上还常刻有一个“油”或“oil”字。 2.普通光镜的使用方法 （1）对光和调焦：首先将显微镜平置于实验台上，转动物镜转换器使低倍镜与镜筒垂直到位（听到“咔”声即可），然后将反光镜凹面对着光源翻动，侧面观察聚光器明亮或从目镜观察视野明亮即说明对光完成。如果此时虽对光较好却是也不够明亮时，应检查聚光器的光圈是否打开，聚光器是否升至最高。 对好光后即将标本置于载物台上的标本夹中（注意标本面向上），先用低倍镜观察。用粗调节器调出物像后，再用细调节器调出清晰物像。在换高倍镜观察时，由于高倍镜视野范围比低倍镜小，故须先将观察内容移至视野中央后再换之。有时显微镜存在偏心现象，此时要记住其偏心的方向和距离。 （2）油镜的原理、使用、保护 在免疫学中主要使用的是油镜。油镜是因为在使用时需用香柏油等作介质而得名。光学显微镜的放大倍数与玻璃透镜的大小有关。油镜的透镜小，镜孔也小，观察时由于聚光器聚集的光源要通过载玻片、空气，才能进入物镜中。玻璃与空气的折光率不同，会产生折射，使一部分光线失掉，进入物镜的光线减少，致使观察视野暗淡，物像不清。如果使用折射率与玻璃相近的油介质，即可减少折射，增加视野亮度，提高分辨率。如图1-2所示。 最常用的油介质为香柏油和石蜡油，其折光率分别为1.515和1.46，与玻璃的折光率1.52相近似（空气为1）。故可达到上述减少折射，增加光亮度的效果