人水通道蛋白4重组质粒的构建和在HKE293细胞中的稳定表达.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………5 研究论文 人水通道蛋白4重组质粒的构建及在HKE293细胞中的稳定 表达 前言…………………………………………………………………。01日U舌…………………………………………………………………0 材料与方法…………………………………………………………11 结果…………………………………………………………………17 9 附图…………………………………………………………………1 讨论…………………………………………………………………25 结论…………………………………………………………………27 参考文献……………………………………………………………27 综述视神经脊髓炎和水通道蛋白4………………………………………30 致谢………………………………………………………………………43 个人简历…………………………………………………………………44 中文摘要 人水通道蛋白4重组质粒的构建及在HKE293细胞中的稳定表达 摘 要 目的：视神经脊髓炎(neuromyelitis nervous 合征，是中枢神经系统(centralsystem，CNS)一种严重的特发 性炎症性脱髓鞘性疾病，主要表现为单相或复发病程的视神经炎和横贯性 脊髓炎。典型特征为病情反复发作，预后较差。NMO的发病机制尚不明 sclerosis， 确。在北美，非白种人口中NMO患者比例比经典MS(multiple MS)患者的高。在亚洲，视神经脊髓型MS是一种常见的炎性脱髓鞘疾 病，在日本它大约占MS的5．40％。亚洲的视神经脊髓型MS和西方的 NMO是同一疾病实体吗?很多呈现NMO初期症状的患者被误诊为MS， 但这两种疾病的预后和最佳治疗方案不同。NMO的临床表现较MS严重 且预后差。第一次发病后的5年内，约50％的患者需要协助行走，约62 ％的患者至少一只眼睛失去功能性视力甚至失明，约15．30％的患者死于 高颈段脊髓炎诱发的呼吸衰竭和脑干参与的致命性自主神经失调。免疫抑 制药物被认为是NMO的最佳治疗，而免疫调节药物是目前推荐的用于早 期MS的有效治疗。直到NMO．IgG被发现，其靶抗原为CNS中的水通 诊断的一个重要指标，但AQP4自身抗体检测的低敏感性和特异性仍是待 解决的重要问题。 本研究试图构建人AQP4的重组质粒，并检测其融合蛋白在人胚肾细 提供一种高敏感性和特异性的实验方法，初步将NMO和MS鉴别开来， 使临床治疗更具有针对性和个体化，并可进一步深入挖掘NMO的可能发 病机制，为疾病活动、复发和转归的预测提供有意义的基础实验依据。 方法： 1人AQP4基因的获取 中文摘要 计其上下游引物，上游引物含NheI酶切位点，下游引物含XhoI酶切位 点。以内参13一肌动蛋白(B．actin)作为阳性对照。 1．2脑组织中总RNA的提取：脑组织取自河北医科大学第二医院神 经外科手术患者，采用Trizol法提取其总对悄，提取产物进行琼脂糖凝胶 电泳鉴定，并测定其纯度和浓度。 1．3 增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析鉴定和纯化。 2重组质粒的构建 I I和Xho AQP49Ii_型a和空质粒pEGFP．N1分别以限制性内切酶Nhe 用T4连接酶连接，将连接产物转化到感受态细胞一大肠杆菌DH5(it，在硫 单克隆后扩大培