流式细胞仪分选转基因斑马鱼胚胎荧光标记细胞的.PDF

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 36(3): 356–360 DOI: 10.11844/cj cb.2014.03.0333 技术与方法 流式细胞仪分选转基因斑马鱼胚胎荧光标记 细胞的一种快速方法 1 2 1 1 2* 1* 王 新 张素珍 王学谦 李丽萍 张晶晶 刘 东 1 2 ( 南通大学, 江苏省神经再生重点实验室, 南通226001; 广东医学院附属医院, 湛江524001) 摘要 荧光蛋白在特异组织和器官表达的转基因斑马鱼已经在发育生物学和疾病模型研究 中得到了广泛的应用。这些转基因系有助于追踪和分析数量较少的细胞群。但是如果要分离得到 这些细胞来定量分析mRNA或蛋白质的表达情况比较困难。利用流式细胞仪分选这些荧光标记细 胞是一种解决办法。此方法在不同的实验室中被广泛地应用, 也有相关流程的介绍。但是流程一 般较为繁琐, 操作比较困难。该文以从转基因斑马鱼Tg(Kdrl:EGFP) 中分选绿色荧光蛋白阳性的血 管内皮细胞为例, 介绍利用流式细胞仪分选转基因斑马鱼荧光标记细胞的实验流程和技术要点。 该文作者在前人工作的基础上结合大量的实验经验, 发展并优化了一套操作简便、效率较高的流 程来分选这些细胞, 在此做详细的介绍给大家以供参考。 关键词 转基因; 分选; 流式细胞仪; 斑马鱼 Sorting the Florescence Positive Cells in Transgenic Zebrafish Embryo by Fluorescence-activated Cell Sorting 1 2 1 1 2 * 1* Wang Xin , Zhang Suzhen , Wang Xueqian , Li Liping , Zhang Jingjing , Liu Dong 1 ( Jangsu Key Laboratory of Neuroregeneration, Nantong University, Nantong 226001, China ; 2Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China) Abstract The florescence proteins are used to specifically label organs, tissues or cell types in transgenic zebrafish reporter lines, which are extensively applied in developmental biology and disease modeling. They allow us to follow the several-labeled cells in vivo. In this paper, we introduced the procedure to sort the florescence positive cells in transgenic zebrafish embryo by fluorescence-activated cell sorting (FACs). Based