不同提取液提取水稻幼苗质外体蛋白效果的比较.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（１）：５１５５ ? 不同提取液提取水稻幼苗质外体蛋白效果的比较 周　露　刘进元 （清华大学生命科学学院分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室　北京　１０００８４） 摘要　提取植物组织质外体蛋白质的主要困难是提取效率低且易被细胞质蛋白污染。为解决上 述问题，以１２天９３１１水稻幼苗为试验材料，使用３种含不同浓度钾和钙离子的缓冲液作为提取 液进行提取效果比较。３种提取液的相同成分都是０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌｐＨ７．６，１ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ，区 别点在于：ＢｕｆｆｅｒＡ含０．２ｍｏｌ／ＬＫＣｌ；ＢｕｆｆｅｒＢ含０．２ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ；ＢｕｆｆｅｒＣ含０．１ｍｏｌ／ＬＫＣｌ和 ２ ０．１ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ。结果表明，ＢｕｆｆｅｒＡ的蛋白产率达到了（０．４９±０．０７）ｍｇ／ｇＦＷ（叶片）和（０．８３± ２ ０．０６）ｍｇ／ｇＦＷ（根部），比ＢｕｆｆｅｒＢ和ＢｕｆｆｅｒＣ分别提高了１２２．７％和５３．１％（叶片）以及１０２．４％ 和５９．６％ （根部）。六磷酸葡萄糖脱氢酶活性检测的结果表明在这些蛋白质提取物中细胞质蛋 白的污染率很低，可以控制在１％以下。这些实验结果说明通过优化提取液，建立了有效提取水 稻幼苗质外体蛋白质的方法，可应用于植物质外体蛋白质组学研究。 关键词　水稻幼苗　质外体蛋白质　提取缓冲液　条件优化 中图分类号　Ｑ９４６．１ ［５］ 　　质外体是指细胞质膜体以外的所有空间，包括细 道却非常少。Ｈａｓｌａｍ等 利用磷酸缓冲液（１００ｍｍｏｌ／ 胞壁、细胞间隙及分化成熟的木质部。自从 Ｒｏｂｅｒｔ Ｌ磷酸缓冲液ｐＨ７．６，１０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ和１４ｍｍｏｌ／Ｌ  ２ β Ｈｏｏｋｅ１６６５年观察到细胞壁的存在一直到上世纪八十 巯基乙醇）对水稻叶片质外体蛋白进行提取，在双向凝 年代，质外体一直被认为是一个固定的静态的结构。 ［６］ 胶上显示了１５０个左右的蛋白斑点；Ｚｈａｎｇ等 用水作 但在过去的二三十年里，越来越多的证据表明植物的 为提取液对水稻幼苗根部质外体蛋白进行提取，在双 质外体是一个动态的组分，对于细胞的分裂、延伸和分 向凝胶上也仅显示了１００个左右的蛋白斑点。而根据 化以及对各种生物和非生物的胁迫应答都是必需的， 生物信息学预测，结果表明植物体内可能有将近１０００ 而且也是很多信号转导的重要信号源，其中质外体蛋 种不同的质外体蛋白。由此可见，对水稻质外体蛋白 白起了关键的作用［１］。但是，与叶绿体、线粒体等其它 提取方法进行优化使其得到尽可能多的蛋白是非常必 亚细胞器蛋白质组学研究不同，由于技术等的限制，质 要的。另外，除了提取得到的蛋白不丰富以外，目前水 外体蛋白质组学的研究还比较少。目前对质外体蛋白 稻质外体蛋白的提取效率也非常低，仅有（０．０４± ［２４］ ［５］ 质的研究大部分都集中在拟南芥和玉米等植物 。 ０．００５）ｍｇ／ｇＦＷ 。而提取液的选择对于蛋白产率以 当前质外体蛋白质研究的瓶颈仍然是如何保证在不受 ［７］