刚地弓形虫RH株速殖子协同VP-16体外杀伤小鼠结肠癌细胞ct26作用.pdfVIP

720 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 201o，26 (8) 文章编号 ：1002—2694(2O10)08—0720—05 刚地弓形虫 RH株速殖子协同VP一16 体外杀伤小鼠结肠癌细胞 ct26的作用 高 剑，叶 彬，武卫华，孔 碌 摘 要：目的 探讨刚地 弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌 ct26细胞周期的影响及其协同细胞周期特异性抗癌药依托 泊甙(VP-16)对ct26细胞的杀伤作用。方法 建立弓形虫RH株速殖子与小鼠结肠癌 ct26细胞不 同比例 的共培养模型(虫 ／ 细胞 比例分别为2：1、4：1、8：1、16：1)，流式细胞仪检测 24h细胞周期改变；以虫细胞 比例 2：1预先感染 ct26细胞 24h， CCK一8比色法观察不同浓度 VP一16对细胞增殖抑制的改变；荧光显微镜观察 VP-16(40*／g／mI)对感染虫体细胞 的形态学改 变。台盼蓝染色观察不 同浓度 VP一16分别作用弓形虫RH株速殖子悬液 (1×10。／mI)2h、4h、12h、24h的虫体存活度 改变。 琼脂糖凝胶 电泳观察 VP一16(20g／mL)对虫体 DNA影响。结果 流式细胞仪检测发现各浓度 弓形虫速殖子均可 明显改变 ct26细胞 24h周期分布 ，使 Go／G,期细胞百分 比下降，G2／M 期百分 比显著升高(P(0．01)。2×10个速殖子感染细胞 24h可 使 s期和 Gz期细胞百分比共同增长 14．92 。CCK一8比色法检测结果显示虫细胞 比例 2：1预先感染 ct26细胞 24h可有效 增强各浓度VP一16对ct26细胞 的杀伤作用；Hochest33258染色结合荧光显微镜观察到虫体胞质寄生形态及vP一16诱导感染 细胞凋亡典型形态 ；10~g／mL及更高浓度 VP一16作用 弓形虫 4h以上均可使虫体全部死亡 ；琼脂糖凝胶 电泳发现 vP一16 (20gg／mI)可使 弓形虫速殖子 DNA 呈现典型 的云梯状条带。结论 弓形虫 RH株速殖子可使小 鼠结肠癌 ct26细胞发生 Gz／M 期，可有效增强细胞周期特异性抗癌药 VP-16的抗癌作用 ，且 弓形虫增殖亦明显受抑并发生凋亡 。 关键词 ：弓形虫；小 鼠结肠癌 ct26细胞 ；依托泊甙；细胞周期。 中图分类号 ：R382．5 文献标识码 ：A TachyzoitesofToxoplasmagondiienhancesthecytotoxicity ofEtoposide(VP-16)tomousecoloncancercellct26invitro GAOJian，YE Bin，WU Wei—hua，KONG Jing (DepartmentofPathobiology，MolecularMedicineandCancerResearchCenter， ChongqingM edicalUniversity，Chongqing400016，China) ABSTRACT：Thepurposeofthisstudywastoinvestigatethechangesofcellcycleofmousecoloncancercellct26infected withToxoplasmagondii(T．gondii)RH straintachyzoitesandtestthesynergisticactionof丁．gondiitachyzoiteswithcell cyclespecificanticancerogenEtoposide (VP～16)forenhancing cytotoxicitytocancercellct26．Theco—culturemodelsofct26 cellswithdifferenttachyzoitesnumbersofT．gondiiRH strain (theproportionswere2：1，4：1，8：1and16：1，respective