重组人胰岛素制备工艺_李晓红.pdfVIP

第 39 卷 第 4 期 四 川 大 学 学 报 ( 工 程 科 学 版 ) Vol. 39 No. 4 2007 年 7 月 JOURNAL OF SICHUAN UN IV ER SITY ( EN GIN EER IN G SC IENCE ED ITION ) Ju ly 2007 　　文章编号 :(2007) 04 007905 重组人胰岛素制备工艺 李晓红 ,朱惠玲 ,余 　蓉 ,李红霞 (四川大学 华西药学院 , 四川 成都 6 1004 1) ( ) ( ) 摘 　要 :为了提高重组人胰岛素的表达量 ,用 E. coli发酵表达 H is 6 - A rg - A rg - 人胰岛素原 [ H is 6 - A rg - A rg - hum an p roin su lin, RRhP I] ,并对影响 RRhP I高效表达的各主要因素以及下游纯化工艺的各关键步骤进行优化 。 研究表明 , RRhP I E. coli在最优培养基 : 5 g/L 胰蛋白胨 , 2 g/L 谷氨酸 , 7 g/L 酵母浸膏 , 0. 5 g/L 酸铵 , 2. 5 g/L 葡萄 糖 , 2. 7 g/L 甘油 , 100 m g/L 氨苄青霉素 , 50 m g/L 卡那霉素 , pH 7. 2 的条件下 ,用发酵罐进行发酵 ,在对数生长中期 加入 0. 5 mmo l/L IPTG诱导 4 h,发酵过程中通过补料和转速调节 ,每升培养基能收获湿菌体 51. 2 g,包涵体 16. 2 g。在下游纯化工艺中 ,初步纯化前包涵体溶解液中一定浓度的 β- 巯基乙醇以及复性液中一定浓度的氧化型谷胱 甘肽将有助于 RRhP I的复性 。经过工艺条件的优化 ,人胰岛素最终收率可达 74 m g/L 培养基 。 关键词 : (H is) 6 - A rg - A rg - 人胰岛素原 ;重组人胰岛素 ;大肠杆菌 中图分类号 : Q578; Q786 文献标识码 : A Prepara tion of Recom b inan t Hum an In sulin L I X iaohong, ZHU H u iling, YU R ong, L I H ong x ia (W est Ch ina School of Pharm acy, Sichuan Un iv. , Chengdu 6 1004 1, Ch ina) A b stract: To ob tain recomb inan t hum an in su lin ( rh I) , (H is) 6 - A rg - A rg - hum an p ro in su lin ( RRhP I) wa s ex ( ) p re ssed by Escherich ia coli E. coli . In the op tim um m edium of 5 g /L tryp tone, 2 g/L glu tam ic acid, 7 g/L yea st extract, 0. 5 g/L ammon ium su l