第11章 分子发光分析法-1.ppt

六、荧光/磷光分析仪器 ——荧光分析仪器 利用汞蒸气放电 发光的光源； 发射线主要有365、 405、 436 nm 应用最广泛的 一种光源，可发射 250~800nm很强的 连续光源 （1）光源 氙（Xe)灯、 高压汞（Hg）灯、 激光器 发光强度最 大的光源；有气 体激光器、固体激 光器和半导 体激光器 （2）单色器 使用汞灯或白炽灯的荧光计一般使用滤光片作为单色器；其它荧光计一般使用光栅作为单色器 （3）样品池 四面石英的1cm样品池 （4）检测器 光电倍增管、二极管阵列检测器 氙灯 氢灯 钨灯 六、荧光/磷光分析仪器 2、磷光分析仪器 与荧光分析仪基本相似，在荧光计上配上磷光附件（磷光镜，包括：低温杜瓦瓶和斩光片）后，即可用于磷光测定. （1）试样室 将试样放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，即可用于低温磷光测定 （2）磷光镜 当物质同时会发生荧光和磷光时，为在有荧光的体系中测定磷光，须在激发单色器和样品池间以及在样品池和发射单色器间各装一个斩波片，并由一个同步马达带动，这种装置称作磷光镜。 七、荧光的常规测定方法 以荧光激发与发射光谱作为定性参数、荧光强度为定量参数的荧光方法称为常规荧光法 分类 用于测定自身具有荧光的物质 用于无荧光或弱荧光物质的测定 通过化学反应使无荧光及弱荧光的物质转化为强荧光体进行测定 利用无荧光及弱荧光物质对强荧光体的猝灭进行测定 荧光衍生法： 荧光猝灭法 敏化荧光法 A + h?1 A* A被激发 + B 能量 交换 B被 激发 A + B* B + h?2 敏化荧光 测定对象 直接荧光法： 间接荧光法： 多组分荧光分析 可用常规荧光法测定； 也可用同步荧光法、导数荧光法、时间分辨荧光法和荧光偏振法等测定 八、磷光的常规测定方法 1、 低温磷光 （1）对溶剂的要求 （2）常用的溶剂 用液氮作冷却剂（77K） 易提纯且在分析波长区无强吸收和发射 低温下形成具足够粘度的透明的刚性玻璃体 能很好地溶解被分析物 EPA——乙醇+异戊烷+二乙醚（2+2+5） IEPA——CH3I+EPA（1+10） 乙醇+甲醇+C2H5I（16+4+1） 八、磷光的常规测定方法 2、室温磷光 （1）固体基质（固体表面）磷光 此法基于测量室温下吸附于固体基质（载体）上的有机化合物所发射的磷光。 能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以增加刚性， 并减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过程 理想的载体 本身不产生磷光背景。 常用载体 滤纸、纤维素、硅胶、玻璃纤维、溴化钾等 八、磷光的常规测定方法 ——室温磷光 （2）胶束增稳的溶液室温磷光法 利用表面活性剂形成的胶束或环糊精改变磷光体的微环境和定向约束力，从而改变磷光体的物理性质，减小内转化和碰撞能量损失等非辐射去活化过程，增加三重态的稳定性，从而实现在室温中测量溶液的磷光. 利用胶束或环糊精的增稳、重原子效应和溶液除氧是该法的三要素. （3）敏化磷光 过程： 受体的选择： 受体不能被激发光激发；受体激发三重态的能量要低于给体；受体的磷光量子产率要高. 分析物 九、荧光与磷光法的应用 无机化合物的分析 有机化合物的分析 生物大分子物质的分析 由于能产生荧光和磷光的物质数量有限，故荧光和磷光很少用于定性分析，主要用于定量分析与机理研究。 1、定量依据： If = Kc 或 Ip = Kc （浓度很低时适用） 3、具体应用对象 2、定量方法： 一般采用外标法和标准加入法 §11-3 化学发光分析法 一、概述 1、化学发光（生物发光）的定义 由化学反应产生的化学能使分子激发，激发态分子回到基态时发光的过程称为化学发光（Chemiluminescence）；生物体内的化学发光称为生物发光(Bioluminescence)。 2、化学发光分析法的特点　 优 点： 具有极高的灵敏度； 仪器设备简单，不需要光源及单色器等； 没有散射光及杂散光等引起的背景干扰； 线性范围宽、分析速度快。 局限性：可供发光的试剂有限；发光机理有待进一步研究。 二、基本原理 1、 化学发光的基本过程 化学能激发 化学发光过程 R P* P + hv1 （紫外、可见、红外区的光） 2、化学发光反应必须满足的条件 （1）化学反应要提供足够的能量生成激发态产物 能产生化学发光的物质多为芳香族化合物；化学发光反应多为氧化反应；发光一般位于可见光区. （2）反应的历程应有利于激发态的形成 （3）激发态分子能够以光的形式辐射能量返回基态 非辐射去活化 P 能量转移 M* 敏化发光 M+hv2 二、基本原理 ?CE大于1?10-6的发光 反应称为强化学发光反 应，?CE小于