人教版教学3、酶生产条件优化以与常用酶应用.pptVIP

第二章 酶的生产 The production of Enzyme ;一、酶的生产方法 ;利用动物、植物细胞和组织培养方法来生产酶，由于周期较长、成本较高，也存在一定难度。 50年代以来酶生产的主要方法。 80年代以来，植物细胞或动物细胞发酵。 主要方式：固态发酵和液体发酵法;1、氧化-还原酶 （1）葡萄糖氧化酶 （来源于霉菌） （2）D氨基酸氧化酶 （来源于霉菌、肾脏） （3）尿激酶 （来源于酵母菌、肾脏） （4）过氧化氢酶 （来源于细菌、霉菌、红血球） （5）近氧化物酶 （来源于植物） 2、转移酶 （1）转氨基酶 （来源于细菌、动物肝脏） （2）核苷磷酸转移酶 （来源于细菌） 3、水解酶脂肪酶 （来源于细菌、霉菌、胰脏）5`-磷酸二酯酶 （来源于霉菌）淀粉酶 （来源于细菌、霉菌、胰脏、麦芽）果胶酶 （来源于细菌、霉菌）纤维素酶 （来源于霉菌、蘑菇）半纤维素酶 （来源于霉菌）溶菌酶 （来源于细菌、鸡卵白）蜜二糖酶 （来源于霉菌）乳糖酶 （来源于细菌、霉菌）转化酶 （来源于细菌、酵母）透明质酸酶 （来源于细菌、动物睾丸）凝乳酶 （来源于霉菌、小牛胃、羊胃）天冬酰胺酶 （来源于细菌）脲酶 （来源于豆科植物）青霉素酰化酶 （来源于细菌、霉菌）氨基酰化酶 （来源于细菌、霉菌、牛肾脏）橙皮苷酶 （来源于霉菌）蛋白酶 （来源于霉菌、放线菌、动物内脏、植物瓜果）;4、裂合酶裂合酶 天冬氨酸-β-脱羧酶 （来源于细菌） β-酪氨酸酶 （来源于细菌） 延胡索酸酶 （来源于细菌） 谷氨酸脱羧酶 （来源于细菌） 5、异构酶 氨基酸消旋酶 （来源于细菌、霉菌、酵母） 葡萄糖异构酶 （来源于细菌、放线菌 ;（1）酶的液体发酵生产一般过程;①微生物种类多、酶种丰富; ②微生物生长繁殖快，酶易提取; ③微生物培养基来源广泛、价格便宜; ④酶发酵生产过程可实现规模化连续化。;3、化学合成法： 60年代中期出现的新技术。 人工合成酶的方法 1969 年，美国首次用化学合成法得到含有124个氨基酸的核糖核酸酶。 要求氨基酸纯度高，合成成本高昂。至今停留在实验室阶段。 目前还受到试剂、设备条件的限制。;1、中心法则（Central Dogma ）;2、RNA的生物合成(转录)- Transcription;过程：RNA聚合酶 DNA启动基因，DNA双螺旋部分解开，以其中一条链为模板，通过碱基互补方式结合进入第一个核苷酸，然后，RNA聚合酶移动，DNA逐渐解开，按模板碱基顺序逐个加入核苷酸并聚合成多聚核苷酸链。转录成的RNA按结构和功能的不同分为mRNA,tRNA和rRNA。;3、翻译： 以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA，酶和辅助因子，合成多肽。 分四个过程： A、氨基酸活化生成氨酰-tRNA B、肽链合成的起始 C、肽链的延长 D、肽链合成的终止;A、氨基酸活化生成氨酰-tRNA 氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，与特定的tRNA结合，由ATP供给能量；;A;A;A;A;B、肽链合成的起始： 在GTP和起始因子参与下核糖体30S亚基、甲酰甲硫氨酰-tRNAF（fMet-tRNAF）、mRNA 和 50S亚基结合组成起始复合物。;①30S与起始因子IF3结合；②30S与mRNA结合形成30S- IF3-mRNA复合物；③fMet-tRNAF与起始因子IF2以及GTP结合；;④在起始因子IF1的参与下，fMet-tRNAF -IF2-GTP与30S- IF3-mRNA结合生成30S起始复合物，fMet-tRNAF正好位于mRNA的起始密码子AUG上；;⑤50S与30 S起始复合物结合，形成具有完整结构的70S 核糖体。同时放出IF1 、IF2 、IF3并使GTP水解生成GDP和Pi； ;C、肽链的延长：在延伸因子的参与下，与mRNA上的密码子对应的氨酰-tRNA进入70S核糖体之中的“A”位。 ;通过肽合成酶的作用，P位上fMet-tRNAF的甲酰甲硫氨酰(fMet)与A位上的氨酰-tRNA(aa1-tRNA：)以肽键结合，形成肽酰-tRNA。 ;mRNA和核糖体作相对移动，A位上的肽酰t-RNA转至P位，而原在P位上的t-RNAF游离出去。然后下一个氨酰-tRNA进入A位，再重复上述过程，使肽链不断延伸，直至终止密码子为止。 ;D、 肽链合成的终止： 随着肽链的延伸，mRNA与70s核糖体不断地作相对移动。;新合成的肽链释放出来需经过加工形成完整空间结构的酶或蛋白质。 先经过肽脱甲酰酶的作用，使甲酰甲硫氨酸残基上的甲酰基除去。 有时还需在氨肽酶的作用下从肽链的N-末端切除一个或数个氨基酸残基。 然后自动折迭弯曲成完整的空