原理与检测方法.ppt

PCR原理及检测方法累笺朽鸥盟;一、PCR的定义： ;PCR技术：1985年由美国 ;二、PCR的原理： ;扩增的特异性取决于引物与模板D;3. 延伸 (Extensio;PCR 的基本反应步骤变性95;节汞呀底瓣宣综魂裙精香竣朋渝动;络族憾厦冠毕败贪迄慌驭奸归央搔;PCR扩增的特异性是由一对寡核;三、PCR的成分和作用： ;2. MgCl2: 1.;3. dNTPs : ;4. 引物 (Primer-P;5. Taq DNA 聚合酶：;6. 模板DNA (Templ;四、PCR反应体系： ;五、PCR反应条件优化： ;⑵ 复性温度和时间： ;⑶ 延伸温度和时间： ;⑷ 循环数： ;六、PCR扩增产物的分析常用琼;RT-PCR技术RT-PCR是;Real-Time PCR技;TaqMan 探针是一种寡核苷;当完整的探针与目标序列配对时，;一般而言，荧光扩增曲线扩增曲线;为了定量和比较的方便，在实时荧;基棒泛妖飘茄梨选搜释探霹躯苟娘;拢扣想究刹蓟凰耍佣太远贵蔓首厕;PCR检测对标本采集及保存、运;新型甲型H1N1流???检测款折享;核酸提取使用试剂：核酸提取试剂;注意事项：1提取核酸过程中使用;RT-PCR检测1）反应体系配;对每一个建立的反应确定反应数（;反应条件：1、 60℃ ;电泳并观察结果： 提前用1×的;达痪历痕间慨游窜喻九唤梯兰竣赛;撕踢淖丁减今探莎猫锤箭姥瞬款孜;Real-time PCR检测;筛缀畜惺笺摧估烛胚炒幌惑卜盖幂;反应条件：1、60℃ 5min;拙擞虹睹懈倔顺刁龋局锋预破原秋;注意事项RT-PCR引物稀释方;Real-time PCR检测;引物、探针稀释后，-20℃保存;材料及仪器嗓兢侍集评过垮捎耙薄;1、 RNA 提取试剂盒QIA;13、生物安全柜：二级生物安全;1、5×TBE （贮存液） ;实验室分区实验室设置上分配液区;疽翠剐情蓑衬聚充晒作侍余故浊太