基因芯片的实验原理和方法.docVIP

基因芯片(Gene Chip,DNA Chip)，又称DNA微阵列(DNA Micorarray)，是指按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在一定条件下，载体上的核酸分子可以与来自样 品的序列互补的核酸片段杂交。如果把样品中的核酸片段进行标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检测到杂交信号。 HYPERLINK /experiment/430/586/587/19158.htm \t _blank 详细 实验方法 HYPERLINK /experiment/160.htm 基因芯片实验原理与方法 实验材料 HYPERLINK /product/%E7%BB%84%E7%BB%87%E6%88%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%A0%B7%E6%9C%AC \t _blank 组织或细胞样本 试剂、试剂盒 HYPERLINK /reagent/Oligo-dT+%28T15%29+-+Roche \t _blank Oligo-dT (T15) - Roche HYPERLINK /reagent/dNTPs \t _blank dNTPs HYPERLINK /reagent/RNasin \t _blank RNasin HYPERLINK /reagent/Superscript+II \t _blank Superscript II HYPERLINK /reagent/Cot-1+DNA \t _blank Cot-1 DNA HYPERLINK /reagent/EDTA \t _blank EDTA HYPERLINK /reagent/NaOH \t _blank NaOH HYPERLINK /reagent/Tris \t _blank Tris 仪器、耗材 HYPERLINK /equipment/%E6%89%AB%E6%8F%8F%E4%BB%AA%EF%BC%9AScanArray+3000 \t _blank 扫描仪：ScanArray 3000 HYPERLINK /equipment/%E5%9B%BE%E5%83%8F%E5%A4%84%E7%90%86%E8%BD%AF%E4%BB%B6%EF%BC%9AGenepix+3.0 \t _blank 图像处理软件：Genepix 3.0 HYPERLINK /equipment/Cartesian+7500%E7%82%B9%E6%A0%B7%E4%BB%AA \t _blank Cartesian 7500点样仪 HYPERLINK /equipment/%E7%A1%85%E7%83%B7%E5%8C%96%E7%8E%BB%E7%89%87 \t _blank 硅烷化玻片 HYPERLINK /equipment/PCR%E4%BB%AA%E5%99%A8 \t _blank PCR仪器 HYPERLINK /equipment/Scan+Microarray+Analysis+System \t _blank Scan Microarray 一、目的 本实验的目的是学会cDNA芯片的使用方法。了解各种基因芯片的基本原理和优缺点。 基因芯片这一技术方法在1991年的Science杂志上被首次提出，其高通量、并行检测的特点适应了分析人类基因组计划所提供的海量的基因序列信息的需要，可以说，人类基因组计划是基因芯片技术发展的原因，而对深人研究基因突变和基因表达的有效方法的需求又是促进基因芯片技术发展的动力。 由于基因芯片高速度、高通量、集约化和低成本的特点，基诞生以来就受到科学界的广泛关注，正如晶体管电路向集成电路发展的经历一样，分子生物学技术的集成化正在使生命科学的研究和应用发生一场革命。 根据固定在芯片载体上的核酸分子的不同，基因芯片可以分为cDNA芯片和寡核昔酸芯片等。寡核昔酸芯片主要基于光引导聚合技术，该技术是Affymetrix公司开发的专利技术，由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 二、原理 基因芯片(Gene Chip,DNA Chip)，又称DNA微阵列(DNA Micorarray)，是指按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在一定条件下，载体上的核酸分子可以与来自样品的序列互补的核酸片段杂交。如果把样品中的核酸片段进行标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检测到杂交信号。 基因芯片技术主要包括四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测和结果分析。 1、芯片制备-目前制备芯片主要以玻璃片或硅片为载体，采用原位合成和微矩阵的方法将寡核苷酸片段或cDNA作为探针按顺序排列在载体上。芯片的制备除了用到微