实验5：肝中酮体的生成(1.ppt

2. 酮体的利用特点 肝内生成，肝外利用（肝中缺乏利用酮体的酶） * 实验五 肝中酮体生成 【目的】 验证肝的生酮能力（生成酮体是肝特有的能力） 【复习】 　　酮体是脂酸在肝分解氧化时特有的中间代谢产物。是乙酰乙酸、?-羟丁酸和丙酮三者的统称。 1. 酮体的生成 部位：肝线粒体 原料：乙酰CoA，主要来自脂酸的?-氧化。 关键酶：HMG CoA合成酶 3. 酮体生成的生理意义 酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。 紫红色化合物 【原理】 丁酸 酮体 肝匀浆 观察显色粉发生的颜色变化，判定在酶的作用下是否有酮体的生成。 显色粉 β-羟丁酸 乙酰乙酸 丙酮 肌匀浆 √ × 【原理】 肝细胞中有生成酮体的酶，能以乙酰CoA为原料合成酮体。本实验以丁酸作为底物，与新鲜肝匀浆一起放入与体内相似的环境中，也可以生成酮体。判断酮体生成与否，可将反应液与显色粉混合，酮体能与显色粉中的亚硝基铁氰化钠反应，生成紫红色化合物。而将丁酸与肌匀浆混合，放在同样的环境中则不能生成酮体，因此也不与显色粉反应。 【实践操作】 取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作 加入物 （滴） 1 2 　 3 洛克液 15 15 15 0.5mol/L丁酸溶液 30 　 — 30 Ph7.6磷酸缓冲液 15 15 15 肝匀浆 20 20 — 肌匀浆 — — 20　 蒸馏水 — 　 30　 — 0.02%甲烯蓝溶液 10　　 10　 10 　 将各管混匀后置３７度水浴40分钟。 15%三氯乙酸溶液 20 20 20 混匀后离心5分钟，用滴管取各管上清液置反应板中。 显色粉一小匙（克） 0.2 0.2 0.2 结果（颜色反应） 　　 　　　　　 　　　　　　　 结果分析　　　　　 肝脏中酶的催化下以丁酸为底物生成酮体，使显色粉变为紫红色。 肌肉中的酶不能催化丁酸生成酮体，显色粉无反应。 紫红色 淡紫红色 白色 肝脏中酶的催化下以肝中残余乙酰CoA为底物生成少量酮体，使显色粉变为淡紫红色。 【注意事项】 1.凹玻板4人用1个。 2.吸取上清液的毛滴管，管对管吸取液体，不能混 用，4人1套。 3.混匀后吸取肝匀浆和肌匀浆。 4.取显色粉后立即盖瓶盖，取量以覆盖半凹槽为 准。 5.蒸馏水取用四人一小管，每管接水到1/3处。 *