拟南芥K+-H+反向转运体AtKEA基因家族的生物学功能概述.docVIP

　　拟南芥K+/H+反向转运体AtKEA基因家族的生物学功能概述 第一章前言 1.1钾的生物学功能及其重要性 钾（potassium)是植物生长所需的最基本营养物质，是植物体中丰度最高的阳离子，其含量达到植物干重的10% (Leigh and 左右（aser et al., 2001)。 .. 1.2植物K+吸收机制 1963年，Epstein和他的同事们研究了不同浓度K+条件下植物根系对K+的吸收率。认为K+的吸收可以用经典的酶动力学米-门方程(Michaelis-Menten model)来分析，提出植物对K+吸收存在两种不同的机制，即机制1 (Mechanism 1)与机制2 (Mechanism 2),后来被称为高亲和转运系统（high-affinity transportsystem, HATS)与低亲和转运系统（lo, LATS)。当外界环境中K+浓度较低时（0.001-0.2mM)，主要以高亲和转运机制吸收K+;而当外界环境中K+浓度较高时（1-lOmM)，则主要以低亲和转运机制吸收K+(Epsteial.,1963)。随着植物转运蛋白研究的深入，发现先前的认识过于模式化和简单化，K+的吸收在高、低亲和转运机制中间往往有功能性的重合，即双亲和性(Hirsch et al., 1998; Santa-Maria et al., 2000)。一般认为，植物中高亲和转运系统（HATS)主要是K+转运蛋白，而低亲和转运系统（LATS)主要是K+通道。高亲和转运系统是逆K+电化学势梯度吸收K+，是一个需要消耗能量的主动运输过程，其能量通过质子粟ATPase水解ATP来提供。当介导K+转运时，通常伴随着或Na+的同向转运向转运体或K+/Na+同向转运体），或者是的反向转运（K+ZET*反向转运体）（Very andSentenac, 2003; Gierth and Maser, 2007)。 .. 第二章材料和方法 2.1实验材料与试剂 拟南芥(Arabidopsis thaliana、野生型Col-0由本实验室保存。突变体订购于 ABRC CArabidopsis Biological Resource Center),为T-DNA插入敲除突变体，以Col-0为背景，经PCR鉴定得到纯合系。突变体皿7-/，SOS2-1, SOS3-1由朱健康教授惠赠。在土壤中（Pindstrup Substrate，Latvia)培养的拟南芥植株，用自来水或营养液淺灌，培养间温度为22deg;C，相对湿度55%,光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照强度为100 nmol s#39;#39; m.2。对于在培养皿中无菌培养的拟南芥，使用20% (v/v)的次氯酸钠对种子进行表面消毒，然后撒播在pH5.8的MS (Murashige and Skoog)固体平板培养基中，置于4deg;C冷室中春化3天后，将培养皿放入温度为22deg;C，相对湿度55%，光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照强度为100 nmol S-1 m_2的条件下萌发并生长。拟南芥植株在低钟处理时，我们使用改良的MS培养基(Pandey et al.，2007)，然后加入所需的KCl浓度。 . 2.2常用培养基和溶液配制 氨节青霉素（Amp)母液：配成100mg/mL7K溶液，0.22 nm滤器过滤除菌，分装后于-2(rc保存备用；卡那霉素（Kan)母液：配成50 mg/mL水溶液，0.22 nm滤器过滤除菌，分装后于-2(rc保存备用；壮观霉素（Sp)母液：配成50 mg/mL水溶液，0.22 pm滤器过滤除菌，分装后于-20t：保存备用；利福平（Rif)母液：配成50 mg/mL水溶液，0.22 nm滤器过滤除菌，分装后于-2(rc保存备用；G418母液：配成200 mg/mL水溶液，0.22哗滤器过滤除菌，分装后于-20deg;C保存备用；50xTris-乙酸（TAE)缓冲液：242gTris，37.2 gNai-EDTA-2H2O, 57.1 mL冰乙酸，定容于1L去离子水中，pH8.5,室温保存；6X DNA电泳加样缓冲液：0.05% (MEDTA, 36%(v/v)甘油，溶解后调pH值至7.0，于室温保存；漠化乙淀(EB母液）：配制成10 mg/tnL的水溶液，保存于棕色瓶中或用招范包裹，储于室温即可，工作浓度0.5Mg/mL;DEPC处理水：将DEPC按体积比为1: 1000加入超纯水中，置于摇床充分摇动过夜，12rC高温高压灭菌30min后，于4deg;C保存；70%乙醇溶液：70mL乙醇加水至l00mL;山梨醇缓冲液：用0.1 M憐酸钠缓冲液（p mM EDTA (pH8.0),高压灭菌后储存于4deg;C冰箱中。 第三章实验结果373.1 AtK