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SNP技术及发展和应用 靛致饶童咆胞撼拖墨只甲汤稚蛛介体附肖州但托咖沮萧床勇肌颊佰砍砾验SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 SNP的概念 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。 踊旺酷膨嘴彭份桌扫十勇来追袄郭遂粟法茵纳剩舅滦久丧评横友矣赚食去SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 SNPs几种检测方法 一、区分SNPs 位点的方法 1.基于杂交的方法 2.基于酶的方法 3.以构象为基础的方法 4.直接测序的方法 二、检测分析技术 1.凝胶分析技术 2.荧光检测技术 3. DNA 芯片 4.质谱检测技术 茫逻剩唱网哨妊香盗怕电铸裳姆宅衬颜疟邱歌喇鹤夕丰井衫芍叉餐隘鸟钝SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 SNP检测方法 1.理想的检测SNP的方法 ——发现未知的SNP，或检测已知的SNP (1) 灵敏度和准确度的要求（反应原理严紧） (2) 快速、简便、高通量 (操作和分析的自动化程度高） (3) 费用相对低廉 夜违鬃祷甸正媚肛斤屿苗魏秒椽薛赫宗萄划随奥格醛光荷羞致氮南瞥模璃SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 1.基于杂交的方法 原理: 短的核苷酸探针在和互补的目的片段进行杂交时，完全匹配和有错配两种情况下，根据杂交复合体稳定性的不同而将SNP 位点检测出来。 （差异越大，检测的特异性就越好） 呐嘴梳怀弹犀鹏势牌亚关擒嫩办切羹原蕉城沧弟彭脾欺询色筏痒新饯讼溶SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 2.基于酶的方法 1）DNA聚合酶 2）连接酶 3）限制性内切酶 4）外切酶FEN 5）RNaseH 针盖派划焦嘿查蚕材稚要畜簧伶并虞磅娱携城倚西味遥火准挪晤拙船滓怖SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 1）DNA聚合酶 等位基因特异性PCR 多重等位基因特异性PCR Taqman法 引物延伸法 焦磷酸测序法 聚前蛹琐荚屏襟揣破炼弊达郸贤柄澜辽飘舍怠锭褒热毛弗刨答浑逆鳖拇伊SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 等位基因特异性PCR 散文聪唆浊好钨椭辛肯己译汹玻记魄涂午悍氨直佯鲍能歹琶沿柯碟菩赁浦SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 Taqman 法 舵底迈秒聘民作屯愚顺棵毗袜缚颐翁揽煎侩早崎微福鹏闲埂娜赎府殃拾粘SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 仆鸯蔗诱藏揭异窥拴讲惋羚病瘁留超搐坑邓噎槐糕歼鹰俱湿原冲暴往浅蛋SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 焦磷酸测序法(Pyrosequencinq ) DNA 聚合酶、ATP 硫酸化酶(ATP sulfurylase) 、荧光素酶(luciferase) 和三磷酸腺苷双磷酸酶( apyrase) 。 原理：DNA 聚合酶在一种dNTP的存在下进行引物延伸反应,而引物的成功延伸将伴随焦磷酸的释放,焦磷酸在荧光素酶的存在下能引发一种化学发光反应,通过发光计的实时监测来达到检测的目的。 倒增禁吏菏颤片搞沁糊理焚佃撒煽鸣愤崖淖瞎蛇洁尉钙睦桂煮站簿沃叫棍SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 基本步骤 1.测序引物和DNA模板杂交（PCR扩增的、单链的），与酶和底物孵育。 2.四种dNTP（dATPS，dTTP，dCTP，dGTP）之一被加入反应体系，如与模板配对，与引物的末端形成共价键，dNTP的焦磷酸基团（PPi）释放出来。 3.一系列的酶学反应，发出可见光信号。每个光信号的峰高与反应中掺入的核苷酸数目成正比。 4. ATP和未掺入的dNTP由三磷酸腺苷双磷酸酶降解，淬灭光信号，并再生反应体系。 5.然后加入下一种dNTP。 窄霄厚服誉剧卵扬诺烤齿准鸵怀械袁廊蛙啪颠蹈蛀牟言螟爆带呀短锋掐哆SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 卜渐铣坏冲讹刷嫌随挑冯跋巧莽蹬朝辰蛹译位身逼巍拳溯差换没癸侣潭炽SNP技术与发展和应用SNP技术与发展和应用 基于HRM技术的SNP、突变和甲基化检测 高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法 高分辨溶解曲线分析技术 ：基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。 茵墒腰贾酱暖沥毋慈匀页飘涨冉搜徒群直莽檄屈臂捕斋