专题1基因工程” 与“专题2细胞工程.pptVIP

;1.主要内容归纳 2.重难点突破 3.达标训练 ;;1.基因工程的理论基础和概念的理解;;1.时间：; 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。;基因工程的别名;1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)来源: (2)化学本质： (3)作用 (4)作用特点： (5)切割方式;什么叫黏性末端？; 举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A 之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。 ;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？; 注意： ①切割的化学键为磷酸二酯键。 ②在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶, 目的是产生相同的黏性末端。 ③将一个基因从DNA分子上切割下来,需要2个限制 酶,同时产生4个黏性末端。 ④不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末 端都相同,同一个DNA分子用不同的限制酶产生的 黏性末端一般不相同。;2.DNA连接酶——“分子缝合针” ;2、“分子缝合针” ——DNA连接酶; [例] 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。; [例] 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。; [例] 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。?;DNA连接酶与DNA聚合酶的比较;3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”;质粒：;大肠杆菌质粒的分子结构示意图：;例题： 3.下列关于DNA连接酶作用的叙述，正确的是（ ） A.将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸 二酯键 B.将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新 形成磷酸二酯键 C.连接两条DNA链上碱基之间的氢键 D.只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接 起来，而不能将双链DNA片段平末端之间进行 连接;（四）基因工程的基本操作程序 ;（四）基因工程的基本操作程序;①从基因文库(基因组文库或cDNA文库)中获取; ②人工合成目的基因:常用的方法有化学合成法和 反转录法。 化学合成法:蛋白质 氨基酸序列 RNA 碱基序列 DNA碱基序列 用4种脱氧核 苷酸人工合成目的基因 反转录法:分离出供体细胞mRNA 单链DNA 合成目的基因（具体过程如下） ;cDNA 合 成 过 程 ;③利 用 PCR 技 术 扩 增;PCR技术—聚合酶链式反应;前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物。; ③PCR扩增技术与DNA复制的比较; (2)基因表达载体的构建——最核心步骤 ①基因表达载体的组成:启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。;注意：①与载体相比较,增加的启动子、目的基因和 终止子三个基因片段,其功能各不相同。 ②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子 (DNA片段)≠终止密码子(RNA)。 ②基因表达载体的构建方法 提醒 该过程把三种工具(只有两种工具酶)全用 上了,是最核心、最关键的一步,在体外进行。; (3)将目的基因导入受体细胞; ①基因工程唯一不涉及到碱基互补配对的操作步骤。 ②微生物做受体细胞主要是个体微小,代谢旺盛, 繁殖速度快,获得目的基因产物多。 ③植物细胞还可用基因枪法和花粉管通道法。 (4)目的基因的检测与鉴定; ;例题： 1.下列有关基因工程技术的叙述,正确的是（ ） A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶 和载体 B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸 序列 C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌 繁殖快 D.