疟原虫镜检技术-制片染色2016.pptVIP

疟原虫镜检技术——制片与染色;主讲内容;血膜的制作（所需设备）;血膜的制作（取血时间）;血膜的制作（取血操作）;取血部位和方法;用于检查疟原虫的血涂片有两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。;涂制厚、薄血膜的位置 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查。 ;厚血膜的制作;薄血膜的制作;正确的推片姿势;标准的疟疾厚薄血膜位置;血膜的编号;制作血膜注意事项;染液的种类;染液的染色原理;注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液的pH值7.0-7.2较好。 染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。;姬氏染液母液配置方法;姬氏染液的染色方法;快染 配制8-10%染液(每张血片约需染液2ml):量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水，直接滴加姬氏原液4-5滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10-15min，清水细缓冲洗，晾干镜检。 慢染 配制3%染液:在染色量筒内量2ml蒸馏水或新鲜凉开水，再滴加姬氏原液2滴，混匀，滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。;血片制作染色评估考核标准;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;血片染色注意事项 ;原虫密度计算;用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略地估计出疟原虫密度。这种方法简便，缺点是计数的疟原虫数受血膜厚薄影响，只能定性，不宜作定量分析。 国内常用。此方法将密度分为6级： 全厚血膜查见疟原虫数在10个以内，记录实际数字 全厚血膜查见疟原虫数在10个以上，但平均每个视野不到1个虫，记录“少” 平均每个视野1~5个虫，记录“＋” 平均每个视野6~10个虫，记录“++” 平均每个视野11~100个虫，记录“+++ ” 平均每个视野100个虫以上，记录“++++ ”;在厚血膜，按要求选择视野，计数200个白细胞，同时计数观察到的疟原虫数，如果原虫密度较低，可增加白细胞计数（500~ 1 000 个）。 白细胞疟原虫计算公式： 疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血的白细胞数 = 疟原虫数/μl血。 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以 8000个白细胞计算(国际标准) ，国内按6000个白细胞计算。;白细胞疟原虫计数法举例;从血膜的左上角开始，横向。计数1个视野后间隔5个视野再计数。适用于疟原虫密度较高时。 在1个视野中，有时会重复计数。先把视野分成4个象限，从右上象限起顺时针方向计数整个视野。 ;;;薄血膜不同区域的红细胞疟原虫感染率有较大差别，通常血膜后端和边缘部疟原虫密度常比前半部或中央部高，所以，镜检时不宜只检查一个角落，应顺玻片的横轴检查。 镜检时，应当记录下所观察到的各种疟原虫，不要笼统地记作混合感染。;疟原虫密度=红细胞原虫感染率X红细胞数/微升血 红细胞原虫感染率（%）= 疟原虫数 ÷计数的红细胞数X 100 % 涂制薄血膜的同时，计数每微升血液中红细胞数，也可按男性500万个/微升血、女性450万个/微升血计算。 疟原虫密度较高时，检查1000个红细胞即可，密度低时，可???公式N=45.5 X （I－P）÷P计算需要检查的红细胞数。N为需要检查的红细胞数， P为1万个红细胞中的疟原虫数，I为血样单位（以1万个红细胞计算），45.5为常数。;谢谢！