聚苹果酸生产菌株出芽短梗霉菌代谢组学样品前处理方法的优化.pdf

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 6 :54-59 聚苹果酸生产菌株出芽短梗霉菌代谢组学样品前处理 方法的优化 1 1 3，4 1，2 范栩嘉  边艳慧  殷海松   乔长晟 （1. 天津科技大学生物工程学院  工业发酵微生物教育部重点实验室，天津  300457；2. 天津北洋百川生物技术有限公司，天津  300457；  3. 天津现代职业技术学院生物工程学院，天津  300350；4. 天津市轻工业化学研究所有限公司，天津  300350） 摘 要 ： 为了得到更加准确和完整的胞内代谢物信息，从而更加真实的反映微生物胞内代谢情况，基于GC-MS平台，从淬 灭剂、提取剂和溶解剂3个方面对代谢组学样品制备过程进行了系统性的优化。对比了不同淬灭剂对胞内代谢物的渗出及细胞损 伤情况，结果表明60% 甲醇/0.9% NaCl效果最佳。研究了不同提取剂、溶解剂的提取和溶解效果，结果显示60% 甲醇提取效果显 著，吡啶溶解效果突出。最终确定了出芽短梗霉菌代谢组样品最适前处理方法 ：预冷的60% 甲醇/0.9% NaCl淬灭细胞，液氮研磨 和反复冻融破碎细胞，预冷的60% 甲醇提取，最后采用吡啶溶解提取物并采用MSTFA 40℃衍生90 min。采用该方法可以检测出 300 多种代谢组分，包括大量氨基酸、有机酸和糖类物质。本方法可以有效的应用于出芽短梗霉菌代谢组学样品的研究。 关键词 ： 代谢组学 ；出芽短梗霉；GC-MS；样品前处理 DOI：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.06.009 Optimization of Sample Pretreatment Method for Metabolomics Studies of Aureobasidium pullulans Producing Polymalic Acid 1 1 3，4 1，2 FAN Xu-jia  BIAN Yan-hui  YIN Hai-song   QIAO Chang-sheng （1. Key Laboratory of Industrial Microbiology of Ministry of Education ，College of Biotechnology ，Tianjin University of Science and Technology ，Tianjin 300457 ；2. Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co. ，Ltd ，Tianjin 300457 ；3. School of Biotechnology ，Tianjin Modern Vocational Technology College ，Tianjin 300350 ；4. Tianjin Research Institute of Light Industrial Chemistry ，Tianjin 300350 ） Abstract:  In order to acquire more accurate and complete intracellular metabolite information，and therefore to more realistically  re