新生大鼠雪旺细胞原代培养方法改良 - 四川动物.pdf

四川动物 年 第 卷 第 期 新生大鼠雪旺细胞原代培养方法改良 陈祥 赵明 周华山 胡火珍 四川大学生命科学学院成都 摘要对常用的阿糖胞苷处理及差速贴壁法进行大鼠雪旺细胞原代培养及纯化的方法进行改进 先用阿糖胞 苷处理杀死大部分的成纤维细胞再用抗 抗体和兔补体处理去除残余成纤维细胞获得纯化的雪旺细胞 此外我们对抗 抗体和兔补体的浓度处理时间等都进行了改进避免了由于雪旺细胞状态不好而引起的 大量雪旺细胞死亡 此方法能够将雪旺细胞的纯度由提高到 关键词 雪旺细胞 原代培养 中图分类号 文献标识码 文章编号 雪旺细胞是外周神经系统的主要胶质细胞在 外周神经保护促进外周神经纤维生长构成髓鞘等 阿糖胞苷 培养基 方面具有重要的功能 它能促进神经发育过程中轴 突的生长 促进神经修复和再生 保 证神经纤维功能正常行使 雪旺细胞的病变能够引 起多种疾病如病理条件下的雪旺细胞是神经纤维 方法 瘤的主要形成细胞 为 雪旺细胞的分离和培养 将新生大鼠置于 了深入相关研究需要通过培养获得高纯度的雪旺 冰上麻醉直至大鼠昏迷在无菌条件下于解剖镜下 细胞 目前常用的原代培养法获得的雪旺细胞纯度 取出其坐骨神经放置在 培养基中待用 不高细胞大量损失获得的雪旺细胞数量少 本研 将收集好的大鼠坐骨神经在常温下以 的转速 究对培养方法进行改良能够弥补上述缺点获得大 离心 弃上层 培养基 加入 事先预 量的高纯度的雪旺细胞 现报道如下 热含有胰蛋白酶和胶原酶的 培 养基于 水浴锅中消化 每隔 轻 材料和方法 轻摇动然后 离心 弃上清液加入 实验材料 培养基含 的培养基并添加双 新生 的野生型大鼠 只 抗 用 移液枪轻轻吹打使组织混匀成悬浊 液接种于处理过的 孔板中置于培 收稿日期 接受日期 作者简介陈祥 女硕士研究生从事干细胞研究 通讯作者 四川动物 年 第 卷 第 期 养箱 湿度 中培养 染色计活细胞数检测到活细胞数 在试管中 加入一抗孵育 洗涤 次 离 阿糖胞苷处理非特异性去除成纤维细胞纯 心 弃上清加入二抗孵育 洗 化雪旺细胞去除培养基用 洗 次更换 次 离心 弃上清加 上 为 含有