中国药科大学分析化学-高效液相色谱法.pptVIP

六、高效液相色谱仪 输液泵 进样器 色谱柱 检测器 工作站 高效液相色谱仪 HPLC 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 泵： 恒压泵 恒流泵:柱塞往复泵 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 色谱柱：由柱管(不锈钢管)和固定相组成 分析柱 φ 2-4.6mm L 10-25cm 常量柱 φ 1-1.5mm L 10-20cm 常微量柱 制备柱 φ 20-50mm L 3-25cm 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 检测器: 紫外检测器 荧光检测器 蒸发光散射检测器 其它检测器 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 六、高效液相色谱仪 T/min 波长(nm) 色谱－光谱图 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 2489UVD 2414RID 2424ELSD 2465ECD WATERS WATERS 六、高效液相色谱仪 超高效液相色谱仪() 小结 熟悉 掌握 了解 HPLC的特点. HPLC的仪器结构及各部件. HPLC中色谱条件的选择. 化学键合相色谱法. 范氏方程在HPLC的表达形式. 分离度影响因素 正相色谱和反相色谱. 习题及解答 3. HPLC流动相的pH值应控制为___________ 　　 小于 H = A + Cu 2-8 1. 反相色谱中固定相的极性 流动相的极性. 2. HPLC中范氏方程的表达式为: ____________________ 填空题： 习题及解答 1. 键合相的键合基团的碳链长度增长后 ( 　 ) A.极性减少 B.极性增大 C.载样量增大 D.载样量减少 2. 提高色谱柱柱效的可行方法是 ( ) A.选择小粒度的固定相 B.降低固定相的粒度分布 C.选择球形固定相 D.匀浆装柱 E.增加柱长 F.选择适宜流动相 G.降低流速 AC ABCD 选择题： 习题及解答 计算题： 1. 用15 cm长的ODS柱分离两个组分，已知在实验条件下柱效 n=2.84×104 m-1，用苯磺酸溶液测得死时间 t0=1.31 min，测得tR1=4.10 min及tR2=4.38 min。 求：（1）k1、k2 、α、R； （2）若增加柱长至30cm，分离度可否达到1.5？ 习题及解答 解：（1） 同理： （2） 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography 分析化学教研室 高效液相色谱仪分析流程仿真系统 高效液相色谱法 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 小结 习题及解答 一、概 述 高效液相色谱法：以经典液相色谱为基础，在气相色谱的理论和实验方法基础上建立的一种分离分析方法。 简称：HPLC；HRLC；SPLC； UPLC 超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography） 与经典LC相比——高效 ◇ 高效填料：3～5 ?m ◇ 高压泵输液 ◇ 高灵敏度的检测器:在线检测 一、概 述 分析对象 流动相差别 GC 能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20% 惰性气体 HPLC 不受样品挥发性和热稳定性的限制，占有机物的80% 液体，种类较多，选择余地广 HPLC与GC区别 一、概 述 HPLC仪器示意图 一、概 述 Agilent 1100 高效液相色谱法 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 二、基本原理 范氏方程（Van Deemter equation)： GC： 填充柱 H = A + B/u + Cu 开口毛细管柱 H = B/u + Cu HPLC： H = A + Cu 原因：T↓；?↑； u↑→ 忽略B/u 二、基本原理 GC 和 HPLC 的 H-u 图 (1) B/u (2) Cu (3) A (4) HPLC 的uopt (5) GC 的uopt 二、基本原理 HPLC： H = A + Cu A = 2?dp