中国医科大学《生物化学》课件-第1章 氨基酸和多肽.pptVIP

----C-C-C-C-COOH γ β α ----C-C-C-C(NH2)-COOH α-氨基酸 ----C-C-C(NH2)-C-COOH β-氨基酸 ----C-C(NH2)-C-C-COOH γ-氨基酸 二、氨基酸的分类 三、氨基酸的酸碱性质 （三）氨基酸的等电点 当溶液为某一pH值时，AA主要以兼性离子的形式存在，分子中所含的正负电荷数目相等，净电荷为0。这一pH值即为AA的等电点（pI）。 在pI时，AA处于静电荷为零的状态，在电场中既不向正极也不向负极移动，即处于两性离子状态。 对于侧链含有可解离基团的AA pI取决于两性离子两边pK’值的算术平均值 酸性AA：pI = (pKa1 + pKa2)/2 碱性AA：pI = (pKa2 + pKa3 )/2 氨基酸的甲醛滴定 四、氨基酸的化学反应 五、氨基酸的分离和分析 4 电渗析法 4 高效液相色谱 3 离子交换层析 六、氨基酸的生产方法 1 水解法 酸水解 碱水解 酶水解 2 微生物发酵 3化学合成法 4 酶合成法 第二节 多肽 多肽（Polypeptide）是由氨基酸通过肽键连接而成的多聚化合物。 肽键（peptide bond）是蛋白质分子中基本的化学键，由一个氨基酸分子的α-羧基和另一个氨基分子的α-氨基缩合脱水而成。 异肽键 两个氨基酸通过侧链羧基或侧链氨基形成的肽键。 肽键的化学特征 具有部分双键特性，不能自由旋转,呈现相对的刚性和平面化。 肽平面、肽单位、二面角 二 多肽的性质 （一） 物理性质 1 相对分子质量 10kD 多肽 10KD蛋白质 2 水溶性 易溶于水 3 旋光性 （二）化学性质 1 多肽的两性电离和等电点 2 多肽的紫外吸收 280nm 3 多肽的变形与金属螯合性 4 多肽的颜色反应 （1）茚三酮反应 蓝色 （2）双缩脲反应 紫红色 （3）米伦反应 红色沉淀 酪氨酸 （4）酚试剂反应 蓝色 谷胱甘肽：γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸 四 多肽的化学合成 （一） 固相合成 1 聚合物载体和连接物 聚合物载体：聚苯乙烯及二乙烯基苯等高聚物的衍生物 1-2%的交联度 连接物：连接载体和目标化合物 反应过程中稳定，反应后能够切割下来不破坏目标分子。 2 基团保护 把氨基酸上不应反应的基团保护起来 （1）氨基的保护 酰化 （2）羧基的保护 酯化 （3）侧链的保护 合适的保护基 （4）脱保护 三氟乙酸脱去不耐酸的保护基。 3 缩合剂 选择合适的缩合剂 4 合成方法 （1）Boc固相法 叔丁氧羰基（Boc）保护α-氨基 缺点：容易脱落；氨基酰化副反应 （2）Fmoc固相法 （二） 组合合成 组合化学(combinatorial chemistry)是将一些称之为构建模块的基本小分子（如氨基酸、核苷酸、单糖以及各种各样的化学分子）通过化学或生物合成的手段，将他们系统的装配成不同组合，由此得到的大量的具有结构多样性的分子，从而建立化学分析库的方法。 （1）混合均分法 （2）迭代法 展开步骤=反应步数×每部反应物数 （3）茶叶袋法 一个袋对应一个产物 （4）多针法 一个针对应一个反应孔 （5）纤维载体 仅适合功能试验 （一）α-氨基参加的反应 NH2 OH R CH COOH + HNO2 R CH COOH+H2O+N2 Van Slyke 法测氨基氮（体积）的基础。 N2中的1/2为氨基氮。 氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 1.与亚硝酸反应 NO2 F O2N + H2N—CH—COOH R NO2 O2N HN—CH—COOH R + HF 弱碱性 DNP-氨基酸 （黄色） DNFB Sanger 法测定N末端氨基酸基础 2.与2,4-二硝基氟苯的反应 —N=C=S + N—CH—COOH H H R PITC —N—C—N—CH—COOH H H R S PTC-氨基酸 —N—C H R S N C C O PTH-氨基酸 pH8.3 无水HF 3. 与苯异硫氰酸酯PITC的反应 苯氨基硫甲酰衍生物 苯乙内硫脲衍生物 Edman降解法基础 4.与丹酰氯（DNS-Cl）反应 （2）成酯  NH2 干燥，HCl  R CH COOH + C2H5OH