清酒曲霉的分子育种.pdfVIP

，·)仓 品 与 崖 磅 Sichuan Food and Fermentation 第4J4卷(第3期) Vo1．44，No．3 清酒曲霉的分子育种 山下伸雄 白鹤酒造(株)研究开发室主任研究员 原 著：山下伸雄，白鹤酒造(株)研究开发室主任研究员 翻 译：张文学，营养与食品卫生学国家重点学科食品、生物技术方向学术负责人，四)1I大学食品工程系教授；李家 民，四川沱牌曲酒股份有限公司副总经理，教授级高工。 1 前言 (ptrA)的分离 清酒曲霉Aspergillus oryzoe是日本酿酒工业中 因曲霉A．oryzoe对各种药剂表现出很强的抗 具有代表性的微生物，它不但在清酒、酱油、豆浆等 性，因此，过去一直未能获得既对A．or~zoe赋予明 传统食品产业中得到广泛应用，而且作为食用酶制 确的抗药性又能作为显性标记的抗药性遗传基因。 剂的生产菌种，具有很高的实用价值，因此也被称为 为此，所采用的是在基因转化受体菌上加入某些营 日本的“国菌”【1]。 养需求性(argB-~，pyrG 或营养源非资化性(niaD-~， 曲霉在清酒酿造过程中生产出有着重要作用的 sC )等遗传基因标记的菌株。但是既要使多核微生 水解酶，与此同时，它还通过各种代谢形式及其形成 物A．or~zoe维持实用性的有用基因性状，又要获取 产物，直接或间接地导致清酒产生独有的香味。然 添加了遗传基因标记的变异菌株，则不是那么容易 而，从另一方面来看，清酒铁锈颜色的形成、酒粕的 的事情，因此一直希望开发出能将野生型菌株作为 褐变以及生酒的恶变味的发生等有害现象的产生， 直接受体菌加以应用的基因转化系统。 也是来自于曲霉产生的酶反应和代谢产物。 通过实验发现，相对于维生素B。的代谢拮抗剂 在清酒酵母的育种中，人们一直将主要着眼点 吡啶(代噻唑)硫胺素来说，A．or~zoe表现出很强的 放在进一步强化其优点，即提高其高香气性和耐受 生育敏感性，另一方面由于具有吡啶(代噻唑)硫胺 酒精的能力等方面，而在清酒曲霉的育种中，则是减 素耐受性的变异菌株出现的频次较高，同时在细胞 少上述不利因素即育种是以“消除缺点”作为中心目 融合实验中吡啶(代噻唑)硫胺素耐受性属于显性性 标来进行的[2-51。 一 状，因此吡啶(代噻唑)硫胺素耐受性受某个显性遗 就具体的育种方法而言，由于A．oryzae无有性 传基因支配的可能性很高。根据这一结果，作者认为 后代，因此一些示例中也对细胞融合等进行了尝试， 通过吡啶(代噻唑)硫胺素耐受性相关变异遗传基因 但是总的来说所采用的方法多是利用紫外线或诱变 的单离，能够作为A．Or~ZOe在基因转化中的显性标 剂的随机变异处理法。不过，该方法需要付出大量的 记来使用。 劳动，同时目的菌株的获得不但存在着偶然性，而且 因此，作者抽提了吡啶(代噻唑)硫胺素耐性自 还会使与酿造适应性相关的有用性状受到损伤之类 然变异菌株即A．oryzoe R一26菌株的全部染色 的风险，所以最近已不太被采用。鉴于存在着上述这 体，并采用含有自主复制序列AMA1的质粒 样的背景，本文作者针对具有较高合理性以及不存 pDHG25 1 1)建立了染色体基因文库。通过利用染色 在偶发性的分子育种方法，在清酒曲霉育种中的适 体基因文库进行鸟枪法基因克隆，其结果从野生型 用性上进行了详细的讨论。