甲基对硫磷降解菌DLLBR在青菜及根际土壤中的定殖研究.PDFVIP

DOI:10.13758/j.cnki.tr.2005.01.020 土 壤 (Soils), 2005, 37 (1): 100~104 ① 甲基对硫磷降解菌DLLBR在青菜及根际土壤中的定殖研究 邱珊莲 1 1, 2 1 2 1＊ 崔中利 王 英 王兴祥 李顺鹏 （1 南京农业大学农业部环境微生物工程重点开放实验室 南京 210095 ； 2 中国科学院南京土壤研究所 南京 210008 ） 摘 要 将 GFP 基因标记的甲基对硫磷降解菌 DLLBR 接入 100 ml LB 培养基，过夜培养达到 1010 cfu/ml， 浇灌到盆钵试验的 800 g 土壤中，20 天后用激光共聚焦显微镜检测其在小青菜植株根部和植株内的定殖及分布。 结果表明标记菌株能够在植株根圈较好地定殖，也能在植株内定殖。30 天后将植株各段研磨破碎，涂布 LB 平板 计数发光菌落数，在根内的定殖数为 4 2 10 cfu/g 根，在茎内的定殖数为 10 cfu/g 茎。结果还发现与不接菌的对照相 比，处理促进了植株内细菌群落结构的变化，尤其是芽孢杆菌的种类和数量明显增加。接菌 45 天后通过土壤计 数检测发现，标记菌株在土壤中的存活力很高，能达到 6 10 cfu/g 土，同时也发现与对照相比，接菌的土壤细菌群 落结构明显发生了变化，细菌种类变化不大，但芽孢杆菌的数量明显增加。 关键词 GFP 基因标记；激光共聚焦显微镜；研磨；植株内细菌群落结构；土壤细菌群落结构 中图分类号 X172 直接向农药污染的环境中释放外源的农药降解 DLL-1 （Pseudomonas putida ）是本实验室从土壤 菌是生物修复的一种有效方法。虽然对农药残留降 中分离得到的 1 株甲基对硫磷降解菌，通过转入 解菌的筛选、应用以及降解机理等的研究已有很多 GFP 标记载体成为稳定遗传的标记菌株 DLLBR ，它 报道，但对这类菌株在土壤中、植物根际和植物体 能够在紫外光和蓝光下发出绿色荧光。DLLBR 采用 内的定殖动态、散布规律和对根际微生物多样性的 LB 培养基，于 30℃下培养，GFP 载体带有卡那霉 影响的研究还鲜有报道。随着绿色荧光蛋白基因 素抗性基因，其使用浓度为 50 μg/ml 。 [1] [2] （GFP ）的发现 、分子生物学方法 和显微技术的 1.2 土壤接种 DLLBR 方法 发展，为农药残留降解菌的微生态学研究提供了有 将 DLLBR 接种到 100 ml 含浓度为 50 μg/ml 卡 效的手段。目前，国外已用荧光显微镜和共聚焦激 那霉素的 LB 液体培养基中，过夜培养至 1010 光扫描显微镜检测GFP 标记的细菌的活性和生态行 cfu/ml，