鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGF—β1的影响.pdfVIP

韩 琳等 鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGF—p1的影响 第l1期 ·1O73· 鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGF—p 的影响 韩 琳 秦建国 任 可 陈志强 许庆友 (北京中医药大学基础医学院，北京 100029) [摘 要] 目的 观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)、转化生长因子(TGF)一B。表达的影响。方法 sD大鼠采 用单侧输尿管结扎(UUO)的方法制备肾间质纤维化模型，将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组与模型组，并设假手术组(分离输尿管后缝合腹部)。 缬沙坦组、鳖甲煎丸组分别给予缬沙坦1O mg·kg_。·d_。、鳖甲煎丸1．6 g·kg_。·dI1灌胃，模型组和假手术组每日给予等容积的蒸馏水。所有动 物于术后第14天断头处死，切取左肾，留取肾组织标本。采用免疫组化及RT-PCR方法观察梗阻侧肾脏ADM、TGF—B。在蛋白及基因水平的表达，放 射免疫法测定ADM在肾组织中蛋白含量。结果 模型组及各治疗组大鼠肾脏ADM蛋白含量、蛋白表达及mRNA的表达较假手术组明显降低，鳖甲 煎丸组、缬沙坦组的含量均高于模型组(P0．05)；TGF—B】的蛋白及mRNA的表达各治疗组明显低于模型组(P0．05)，鳖甲煎丸组、缬沙坦组两组 之间比较无显著性差异。结论 鳖甲煎丸能够上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达，下调TGF—B。的表达，对肾脏起到 保护作用。 [关键词] 鳖甲煎丸；肾间质纤维化；肾上腺髓质素；转化生长因子．B [中图分类号] R285．5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2008)11·1073-03 肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)是新发现的一种内源 10 mg·kg～·d～、鳖甲煎丸1．6 g·kg～·d 灌胃，模型组和 性血管活性肽，在心肾功能调节中发挥重要作用。最近研究发 假手术组每日给予等容积的蒸馏水。所有动物于术后第14天 现ADM具有拮抗转化生长因子 pl(Transforming growth 断头处死，切取左肾，留取肾组织标本。按冠状位纵形剖开，置 factor~ ，TGF—p )的促纤维化作用而减轻肾小管间质的损 于4％多聚甲醛(含0．1％ DEPC)中，石蜡包埋，留取部分新 伤…。大量动物实验显示，活血化瘀中药能抑制TGF的表达， 鲜肾组织匀浆采用放射免疫法测组织中ADM的蛋白含量，部 对肾脏起到保护作用，但这种作用是否与其他血管活性肽的参 分肾组织保留于一70℃冰箱中以备提取总RNA用于RT—PCR。 与有关尚不清楚，为了证明其可能的作用机制，为临床用药提 1．4 肾组织中ADM含量的测定 于实验结束时剖杀动物取 供理论和实验依据，本文采用单侧输尿管结扎方法制备肾问质 出肾组织，吸去血迹，称重，快速放人生理盐水1 ml轻轻研磨， 纤维化模型，并给予活血化瘀、软坚散结的鳖甲煎丸，观察鳖甲 然后在 IO0~C水浴中煮沸 10 min，再次研磨制成匀浆，4E 煎丸对大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGF—p。表达的影响，探讨鳖 3 000 r／min离心15 min，取上清一20℃以下保存。用放免药盒 甲煎丸拮抗肾间质纤维化可能的作用机制。 测定组织中的ADM的含量(按说明书操作)，同时测定上清液 中的蛋白含量给以校正。 1 材料与方法 1．5 ADM、TGF—p】免疫组织化学检查 采用DaKo Envision 1．1 动物 雌性sD大鼠40只，体重(180±10)g，清洁级，由 两步法。一抗为小鼠抗大鼠ADM抗体(1：60)，小鼠抗大鼠 河北医科大学动物中心提供。 TGF—p。抗体(1：100)。显色系统为EnVision +／HRP(DAKO 1．2 药物与试剂 鳖甲煎丸(杭州胡庆余堂制药厂生产)，缬 公司产品)，每次染色均以PBS替代一抗作为阴性对照。 沙坦(诺华公司提供)，大鼠ADM抗体(武汉博士德生物有限