鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达.pdfVIP

第3O卷 第7期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．NO．7 2008年 7月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Ju1． 2008 鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达 余旭平 ，胡东建 ，郑新添 ，竺 春 。刘晓宁 。于洪涛 (1．浙江大学动物预防医学研究所，浙江杭州310029 2．龙岩学院生物科学与工程系，福建龙岩364000) 摘 要：根据已发表的鹅圆环病毒 GoCV．ykl株的序列，设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap)，用 BamH I和EcoR I双酶切后插入到原核表达栽体pET．28a中，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达，经 SDS．PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带 应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域，新设计一对引 物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因，将截短Cap基因克隆入pET．28a进行融合表达，经 SDS．PAGE电泳和Western blot检测，截短Cap蛋白获得了高效表达，融合蛋白的分子量约为27．6 ku，表达产物 以包涵体形式存在，其表达量可以达茵体总蛋白的l8．3％。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测 方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。 关键词：鹅；圆环病毒；核衣壳蛋白基因；核定位信号；原核表达 中图分类号：$852．659 文献标识码：A 文章编号：1008．0589(2008)07—0505—05 Expression of the recom binant capsid protein of goose circovirus in E．coli system YU Xu—ping ，HU Dong-jian ，ZHENG Xin—tian ，ZHU Chun ，LIU Xiao—ning ，YU Hong-tao (1．Institute of Preventive Veterinary Medicine，Zhejiang University，Hangzhou 3 10029，China； 2 Bioscience and Bioengineering Department，Longyan College，Longyan 364000，China) Abstract：The full—length Cap gene was amplified with a pair of primers designed based on the published goose circovirus (GoCV—yk1)sequence．The amplified DNA digested with BamH I and EcoR 1 was inserted into pET一28a vector．However，the Cap gene failed to expressed in BE2 1(DE3)analyzed by SDS．Therefore，a truncated Cap gene without the coding region of nuclear localization signal was amplified with a new pair of primers．The gene was subcloned into pET一28a vector and trans— ferred into BL2 1(DE3)for expression．SDS—PAGE and Western blot analysis showed that the truncated Cap recombinant protein was about 27．6 ku and up to 1 8,3％ of the total bacteria proteins．mainly in form of inclusion body．The recombin