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核外遗传物质的结构及功能 质粒DNA Plasmid 线粒体DNA 叶绿体DNA 质粒是分子生物学中最常见的克隆载体。 基因克隆/DNA扩增 /测序、表达 转位因子 Transposable element 基因组中的一个独立单位，在基因组中可移动，是一个更小，更低级的结构单位。——DNA的流动性 定义： 能够进行复制并将一个拷贝插入新位点的DNA序列。（能在基因组中移动的DNA序列叫转位因子 ）由于它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁所以又称跳跃基因（jump-gene）抗药性 存在： 原核生物、植物中广泛存在，少数存在于动物中。 最早于20世纪40年代由美国冷泉港实验室B.Mc Clintock发现玉米的颜色变化与某些基因的关启有关，而这些基因的关启可能与某些因子的控制有关，而这些因子在基因组中是可以移动的——控制因子。当时这一发现并没有引起人们的注意； 直到70年代Shapiro发现大肠杆菌的乳糖操纵子的突变是由于插入了一段序列，后来又发现了其它转位因子后，McClintock的发现才被重视； 1983年Clintock荣获诺贝尔生物学医学奖。 转位因子的结构特点： 1. 两端存在末端重复序列inverted terminal repeats （IR），是转位过程中至关重要的结构； 2.绝大多数的转位因子含有开放阅读框，（ORF），编码一个转位酶，促进转位因子的转位； 3.受体DNA在接受插入DNA后，在插入序列的两侧形成同向重复序列； 4. 受体（靶序列）没有确定的特异性，但趋向于一个“热点”区域——即所谓“区域性优先”。 取决于DNA双螺旋状态，或DNA-PRO结合状态 原核生物的转位因子: IS因子 insert sequence 转位子Tn（ Transposon ）——复合转座子 Mu-噬菌体 Mutation-phage 1.IS 因子 insert sequence 最简单的转位因子 含有末端反向重复序列和转位酶基因 15-25bp 控制转位频率 IS因子插入后, 受体两端产生同向重复序列 长度不一, 0.7-1.4kb E . coli的F因子和核染色体组上有一些相同的IS（如IS2，IS3等），通过这些同源序列间的重组，就可使 F因子插入到E . coli的核染色体组上，从而使后者成为Hfr菌株。 2. 转位子 Tn Transposon 长度比IS序列大 5-20Kb, 两端有反向重复序列IR，有的就是IS因子。 同向/反向；相同或不同 除含有转位酶基因外,还可能含有其他结构基因，如抗性基因、抗重金属离子基因等(Tn1-ampR; Tn3—AmpR, Tn5和Tn6—KanaR)。 对于复合型转座子来说，随着中央序列的增长，转座的频率降低。所以长度的依赖性是决定普通复合型转座子大小的一个因素。 支持复合型转座子转座的一个主要的动力是对中心区所携带的标志的选择。 3. Mu-噬菌体 Mutation-phage 一种以大肠杆菌为寄主的温和噬菌体，以裂解生长和溶源生长两种方式之一繁衍自己。 噬菌体存在于大肠杆菌细胞质中，通过整合到寄主染色体上成为源噬菌体状态，并与寄主DNA一起复制，这一现象称溶源化。 裂解生长 Mu DNA为线状分子，分子量最大（37kb），它含有多个基因。整合到宿主核基因组中去，会引起染色体上许多位点 的突变，故也叫突变因子（Mutator）, 其中约有2%是营养缺陷型突变。 Mu的转座频率比一般的转座子要高 不同类型的转座 （1）复制型转座（replicative transposition）作为自身移动的一个部分，转座子被复制，一个拷贝仍然保留在原来的位置上，而另一个则插入到一个新的部位，这样转座过程伴随着转座子拷贝数的增加。 （2） 非复制型转座 转座元件作为一个物理实体直接由一个部位转移到另一个部位。 反转座子和反转录病毒 转座元件或转座子是基因组中可移动的独立的DNA序列，一个转座子可由基因组的一个位置移到另一个位置。从DNA到DNA的转移过程称为转座。从DNA到RNA再到DNA的过程称为反转座。 反转座是经RNA介导的转座过程。 必须经过RNA中间体的转座过程是真核生物所特有的。 一些真核细胞的转座子和反转录病毒的原病毒的