杂交鳢 斑鳢 g乌鳢 弹状病毒 $^F5.PDF

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 杂交鳢斑鳢 乌鳢 弹状病毒 实时荧光定量检测方法的建立及应用 刘 春 曾伟伟 王 庆 李凯彬 王 芳 常藕琴 梁慧丽 吴淑勤 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术重点实验室广东 广州 摘要 为了建立一种能在临床上快速准确检测杂交鳢弹状病毒 的 实时荧 光定量方法利用 技术扩增 蛋白的全长序列构建重组质粒作为 荧光定量 的标准品根据 蛋白的保守序列设计合成了一对能特异性 扩增 片段的引物和 探针以标准品为模板建立 的 实时荧光 定量 检测方法并对该方法的灵敏度可重复性和特异性进行评价 结果显示建立的荧 光定量 检测方法标准曲线有较好的线性关系相关系数 为 斜率为 荧光定量 最低可以检测到 个病毒核酸分子拷贝而传统 方法最低可检测到 个拷贝 个平行样品重复性实验组内变异系数为 对其他 种水产养殖常见病毒 均无扩增反应 应用该方法对采集的 份患病鳢样品进行检测其中 份为阳性与细胞分 离和电镜观察结果相同以传统 方法检测同样的样品仅 份为阳性 本研究建立的 实时荧光定量 方法灵敏度高特异性强能较好的用于临床 的检测对 病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义 关键词 杂交鳢 弹状病毒 蛋白 检测方法 中图分类号 文献标志码 杂交鳢 月以来广东省的广州佛山中山清远等多个地 是 以斑 鳢 为母 本 乌 鳢 方养殖场暴发杂交鳢大规模死亡的流行性疾病 为父本通过杂交获得的子一代 造成巨大的经济损失 本研究室从细菌学和病毒 杂交鳢综合了亲本的优点在实际生产过程中具 学 方面对患病鱼进行分析确认引起养殖鱼暴 有生长速度快抗逆性强成活率高耐运输易驯 发性死亡的疾病为弹状病毒病其病原为杂交鳢 食人工配合饲料等优点 由于杂交鳢的养殖 弹 状 病 毒 经济效益明显近年在全国范围内养殖规模不断 扩大已逐步替代乌鳢斑鳢等鳢科鱼类成为主要 弹状病毒为线性负链单链病毒病毒粒 的养殖品种 自然条件下鳢科鱼类抗病能 子大小为 形态似 力极强极少发病但是近几年随着国内鳢科鱼类 棒状或子弹状通常具有 种主要结构蛋白 养殖业的发展养殖密度不断增加养殖水体水质 弹状病毒科包括 种以上的成 也越来越差不断有关于鳢科鱼类患病的报道主